五味保肝口服液是由南京中医药大学临床专家提供的有效验方,以传统中医药理论为指导,按照保健食品的配方要求,研制开发的保健食品。由葛根、五味子、人参、甘草、枸杞子等组成,具有养阴清热,化瘀通络的功效,用于预防酒毒伤中、络脉不和所致的酒精性肝损伤。酒精性肝损伤(ALD)是由于长期大量饮酒所致的肝类疾病,在临床上主要表现为脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纤维化,进而发展成为不可逆的肝硬化。本课题旨在按照SFDA《保健食品注册管理办法(试行)》保健食品的注册申报要求,对本品的制剂工艺、质量标准以及初步稳定性进行相关研究,并根据《对化学性肝损伤有辅助保护功能评价方法(修订稿)》的相关要求,对本品进行初步功能学试验研究,探讨其对酒精性肝损伤的辅助保护功能。对配方中的主要原料进行分析,确定其有效成分,根据有效成分的理化性质,设计生产工艺路线,并对可能的影响生产的各种因素及技术条件进行优选。1.以葛根素、五味子醇甲含量、浸出物得率为指标,采用L9(34)正交试验对葛根、五味子、人参的醇提工艺进行优选,确定醇提最佳工艺为:加入饮片总量12倍量70%乙醇,回流提取三次,每次1.5小时;2.以甘草苷、甘草酸铵、多糖含量、浸出物得率为指标,采用L9(34)正交试验对甘草、枸杞子等的水提工艺进行优选,确定水提最佳工艺为:加入饮片总量15倍量水,浸泡0.5小时,提取二次,每次1.5小时;3.采用水提醇沉法进行精制工艺研究,分别考察不醇沉、40%乙醇醇沉、50%乙醇醇沉、60%乙醇醇沉的方法,最终确定精制工艺为.:将水提液浓缩至相对密度1.05～1.08(60℃),加乙醇至含醇量达50%,静置48小时;4.以葛根素、五味子醇甲、甘草酸铵、多糖含量为考察指标,对浓缩工艺进行考察,确定浓缩最佳工艺为:将醇沉后的水提液浓缩,与醇提浓缩液合并,经0.095Mpa、60℃减压浓缩至相对密度1.12～1.15(60℃);5.考察离心工艺、pH值、矫味剂、防腐剂等对制剂成型工艺的影响,确定制剂成型工艺条件为:调节pH值6.0～7.0,加入6%的单糖浆作为矫味剂,加入0.5‰的对羟基苯甲酸乙酯作为防腐剂;6.三批中试验证试验结果表明:葛根素、五味子醇甲转移率均大于60%,表明制剂工艺稳定、可行。按照《保健食品行政许可受理审查要点》保健食品质量标准的相关要求,对本品进行质量标准研究。1.按照《保健(功能)食品通用标准》及《中国药典》2010年版一部附录I J合剂项下的相关规定,对中试样品的相对密度、pH值、净含量、重金属限度、微生物限度等进行检查,结果均符合要求;2.采用HPLC同时测定功效成分葛根素、五味子醇甲含量,方法学考察结果表明:葛根素、五味子醇甲分别在0.1058～0.5289、0.0075～0.0376mg/ml范围内与相应的峰面积线性关系良好,平均回收率分别为:100.06%、101.11%,RSD分别为:2.64%、0.64%。根据三批中试样品含量测定结果,制定了葛根素、五味子醇甲的含量限度,暂定本品每支含葛根素不得少于45.5mg,五味子醇甲不得少于1.9mg,规格为10ml/支;3.按照GB/T 1.1-2009《标准化工作导则》相关要求编写五味保肝口服液质量标准(草案)。按照《保健食品稳定性试验指导原则》相关要求,考察本品在不同环境条件下(如温度、相对湿度等)的感官、化学、物理及生物学随时间增加其变化程度和规律,从而判断样品包装、贮存条件和保质期内的稳定性。分别对三批中试样品的性状、鉴别、检查、葛根素、五味子醇甲含量等进行室温留样12个月和加速稳定性3个月的试验考察,结果表明:在考察期内本品质量稳定。稳定性研究仍继续进行,以确定其实际有效期限。按照《对化学性肝损伤有辅助保护功能评价方法(修订稿)》相关要求,对五味保肝口服液进行初步功能学试验研究,结果表明:各剂量组均可不同程度的降低亚急性酒精性肝损伤小鼠血清中总胆固醇(CHOL)、血清胆红素(TBIL),低密度脂蛋白(LDL)含量,改善肝组织病理程度,且中剂量组与模型组比较有显著性差异,表明本品对化学性肝损伤有良好的辅助保护功能。本课题在中医药理论的指导下,根据《卫生部进一步规范保健食品原料的通知》相关要求,结合拟申报保健功能常用的功效性成分,优选制剂原料,科学配方;此外,根据所选原料主要有效成分的理化性质,结合生产实际,运用现代制剂技术及质量控制手段,完成了五味保肝口服液的药学研究及初步功能学研究,为开发一种工艺合理、质量稳定可控、安全有效地对酒精性肝损伤有辅助保护功能的保健食品提供科学依据。