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眼内压升高是青光眼的发生和病程进展的主要危险因素之一，降低眼内压是青光眼的首要治疗目标。应用药物减少房水生成以降低眼内压至今仍然是青光眼治疗的主要手段之一。 房水由睫状体上皮分泌而来。睫状体上皮由双层细胞构成：内层为朝向房水的非色素上皮细胞，外层为紧邻睫状体基质的色素上皮细胞。到目前为止，人们对房水生成的具体机制仍不甚清楚。越来越多的研究表明溶质尤其是离子的主动转运是房水生成的主要驱动力（约占70—80％）。阴离子尤其是HCO3-和Cl-在房水生成过程中起着重要作用。 一氧化氮（nitric oxide，NO）是一个活跃的化学分子，由NO合成酶（NO synthase，NOS）催化L—精氨酸而来。NO作为重要的细胞内信使，广泛地参与体内多种生理、病理过程。NOS在眼内含量丰富，NO在眼部与血流调节、调节眼压、视觉形成与传导、各种眼内炎症，神经元细胞毒性，免疫介导等作用有关。 NO对房水的代谢具有调节作用，能增加房水的排出。但是，到目前为止NO对房水生成的调节作用研究甚少，尚无定论。而在其他与体液分泌有关的组织中，NO能调节体液的生成。免疫组化和电生理的一些研究表明NO很可能参与了房水生成的调节，并且可能接介导了某些影响房水代谢的药物（例如环腺苷酸，异丙肾上腺素等）的作用。 本课题旨在研究NO在睫状体上的合成以及药物对其合成的调节，进一步研究NO对睫状体上皮跨细胞离子转运的调控（间接反应房水生成），具体内容包括：浙江大学2004博士学位论文 1)研究forsk。lin对NOS在睫状体尚表达的影响，以及brimonidine（一种a:一肾上腺素能受体激动剂，降眼压新药，能抑制cAMP的合成）对forskolin的作用的影响; 2)测定亚硝酸盐（一种N0的稳定化合物）在睫状体的合成，评价forskolin对其合成的影响，以及brimonidin。对forskolin作用的影响;研究。2一肾上腺素能受体和Gi一蛋白是否介导了brimonidine的药理效应; 3)建立USSing一type Chamber系统，测定离体人眼和猪眼睫状体离子转运，并以常用的影响房水代谢的药物对系统进行评价; 4以Ussing一tyPe chamber系统评价N0一CGMP一蛋白激酶G信号通路对离体睫状体离子转运的影响，研究N0引起的离子转运改变中的离子成分和机制。 本课题的研究结果，对于进一步研究房水生成的分子机制、阐明N0对房水生成的调控作用、了解某些药物的降眼压机制具有重要意义。同时，本研究的结果将为设计和开发新型的抑制房水生成从而降低眼内压的药物提供理论基础，造福广大青光眼患者。此外，本研究对于从房水生成和调控的角度阐明青光眼性眼部改变也将具有重要参考价值。 第一部分睫状体中NO合成酶（NO Synthase，NOS）的表达以及药物对其表达的影响目的:己知Q:受体激动剂brimonidine能抑制组织中环腺昔酸的合成，腺普酸环化酶激动剂forskol in能刺激一氧化氮（Ni七ric oxide，NO）的合成。本实验研究forskolin能否增强NO合成酶（NO Syn七hase，NOS）在猪眼睫状体上的表达，且这一作用是否能被brimonidine阻断。材料和方法:蛋白印迹（westem blot）法检测并半定量分析三种NO合成酶NOSI（神经元型Nos或nNOs），NOS 11（巨噬细胞型NOs或macNoS），and NoS 111（内皮细胞型NOS或eNoS）在离体猪眼睫状体上的表达。在brimonidine（1协M）存在的情况下，将组织与forskolin（1林M）共同培养24小时，检测三种Nos的表达。结果:离体猪眼睫状体上检测到三种Nos的基础表达，其中Nosl的表达量是Noslll的2倍左右，是NOSH的6倍左右。Forskolin显著增强NOSI的表达（对照的4.5倍左右，P<0.001），这一增强作用能被brimonidine阻断（P<0.001）。Bimonidine对NOsl的表达抑制作用不显著（尸>0.05）。Forskolin和brimonidine对Nos 11和NoS 111 protein的表达无显著影响（P>0 .05）.浙江大学2004博士学位论文结论:已知NO调节体内某些组织器官（如肺、肾脏、结肠等）的体液分泌过程，本实验结果显示forskolin和brimonidine能调节NOSI蛋白在睫状体上的表达，表明NO可能介导forskolin和brimonidine调节房水代谢的作用。 第二部分 离体猪眼睫状体中N0的合成以及药物对其合成的影响目的:已知a:受体激动剂brimonidine能抑制腺普酸环化酶激动剂forskolin的促NOS合成酶表达作用，本实验检测猪眼睫状体上亚硝酸盐（一种No的稳定化合物）的合成，研究brimonidine能否抑制forskolin引起的促亚硝酸盐生成。材料和方法:以Griess反应的方法检测亚硝酸盐的生成。将组织与forskolin（0 .1林M）或8一嗅一cAMP（l0仁M，一种cAMP类似物）共培养，研究在下列药物存在的情况下亚硝酸盐的生成情况:brimonidine（0.01一10林M），育亨宾（yohimbine，0.1一10林M;a:一肾上腺素能受体拮抗剂），呱哇嗦（prazosin，10林M;。1一肾上腺素能受体拮抗剂），尼麦角林（nieefgoline，10林M;选择性Ql一肾上腺素能受体拮抗剂），普纳洛尔（P roPranof。，10林M;p一肾上腺素能受体拮抗剂），和/