论文部分内容阅读
脂肪酶是重要的工业酶制剂品种之一,为适应工业用酶的需求,对脂肪酶的研究主要集中在开发新的脂肪酶和改造现有脂肪酶两个方面。本课题旨在筛选和克隆具有特定应用潜能的脂肪酶基因,实现部分有价值脂肪酶的高效表达,为其工业应用打下基础。通过筛菌过程获得三株产脂肪酶的菌株,分别属于变形杆菌属、短小芽孢杆菌和铜绿假单胞菌。对这三株产脂肪酶菌株中的脂肪酶基因进行克隆,获得三条脂肪酶基因,成功构建了多个不同的重组表达质粒,通过诱导表达,酶活测定,最终获得各个基因的最优重组表达质粒,并对得到的脂肪酶进行酶学性质的研究。来源于变形杆菌的脂肪酶基因lipK19,大小为864bp,编码287个氨基酸,与已报道的脂肪酶基因K80、PVL均有92%的同源性。最优的重组表达质粒pET28a-lipK19,表达酶活可达1500U/L。最适温度为40℃,最适pH为9,热稳定较差,在pH碱性范围内有一定的耐受性,Ca2+对其酶活有促进作用,EDTA、表面活性剂对其酶活都有很强的抑制作用,有机耐受性比较好。来源于短小芽孢杆菌的脂肪酶基因lipS6,大小为648bp,编码215个氨基酸,与已报道的B26的全长基因有96%的同源性。构建重组表达质粒为pET32a-lipS6,表达酶活可达2000U/L。最适温度为35℃,最适pH为9,热稳定性和酸碱耐受性均不是很好,Ca2+对其酶活有促进作用,酯化作用的最适底物酸为十四酸,最适作用底物醇为正丁醇。来源于铜绿假单胞菌的脂肪酶基因lipA,大小为936bp,编码311个氨基酸,伴侣蛋白基因lipB大小为1023bp,编码340个氨基酸,两者与已报道的相关序列有99%同源性。选择pACYCDuet-lipA-lipB为重组表达质粒,酶活可达8500U/L。最适温度为30℃,最适pH为9,pH适用范围比较广,对酸碱有较强的耐受能力,耐受范围较广,Ca2+对其酶活有促进作用,EDTA、表面活性剂对其酶活都有很强的抑制作用,有机耐受性比较好,酯化作用最适作用底物酸为正辛酸,最适底物醇为正己醇。