研究背景:大肠癌是消化道常见的恶性肿瘤之一,目前,主要的治疗方法为手术治疗,但近几年来,对于晚期及有转移的患者,这一方法已达到治疗的极限。因此,需要寻找人为干预治疗方案来打破这一治疗瓶颈。肠癌病人死亡的主要诱因,为组织,器官等的转移。研究表明:粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)作为胞内一重要的信号分子,集中了细胞内的各个信号通道,在细胞的移动和侵袭中起至关重要的作用。在较高侵袭性和转移性的卵巢癌等肿瘤中往往伴随FAK高表达,可见,FAK与肿瘤的侵袭和转移密不可分。载体构建RNA干扰技术近几年得到的较多的应用,其中,慢病毒构建的si-RNA载体以其可以在靶基因中长期稳定表达,感染性强,生物安全性高,免疫反应小等特点,在众多基因转移载体中脱颖而出。并且已有siRNAFAK治疗卵巢癌方面报道,效果满意。有研究表明,sh-RNA诱导基因沉默的效果优于siRNA。本课题组应用慢病毒载体制备了针对FAK的小shRNA(shRNAmirFAKGIPZ),感染人转移性大肠癌细胞株sw-620,初步证实具有满意的抑瘤作用(厦门市科技局资助:3502Z20074007)。有报道化疗可改变肿瘤基因的表达,并且siRNAFAK可通过诱导凋亡机制诱导耐药卵巢癌细胞株对铂类及紫杉醇的敏感性。5-FU、铂类及紫杉醇等已公认是大肠癌化疗一线药物,其杀伤肿瘤细胞并诱导凋亡及坏死。化疗耐药多数与肿瘤转移及复发相关。有研究推测FAK可能是介导肿瘤细胞耐药的关键因子。目的:基于上述,本实验进一步观察shRNAFAK对转移大肠癌的疗效及能否增强化疗对大肠癌耐药细胞株的杀伤作用。主要通过体内裸鼠移植瘤试验,观察FAK降低后是否增强裸鼠对药物敏感性,探讨其可能机制及应用价值。方法:重组RNAi质粒转化大肠杆菌DH5α感受态细菌,扩增,筛选的阳性克隆提取并测序鉴定,构建sh-RNA FAK慢病毒载体,产生重组病毒,转染大肠癌细胞株sw-620。以上细胞或分子实验等工作已经有人研究过。我们主要构建稳定转染的FAK沉默结肠癌sw-620细胞株的裸鼠移植瘤模型。将40只裸鼠分为sw-620-shCtrl细胞注射组和sw-620-shFAK细胞注射组,并分别用三种临床常见的化疗药物:五氟尿嘧啶(5-FU)、紫杉醇(PTX)、奥沙利铂(Oxaliplatin)对裸鼠进行给药。观察记录裸鼠的肿瘤体积,肿瘤重量。苏木素-伊红染色(HE)验证裸鼠接种sw-620细胞和给药后淋巴组织,肝组织,肾组织,肺组织的组织表型变化。结果:称重结果显示,不同组瘤重之间差异显著:sh-Ctrl组瘤重最大,平均为1.38±0.16,抑瘤率为0%。苏木素-伊红染色(HE)结果显示,注射了sw-620-sh-Ctrl细胞的裸鼠中,肿瘤的淋巴转移明显,而注射了 sw-620-sh-FAK细胞的裸鼠,淋巴转移有所减弱。而在用三种不同药物处理的裸鼠中,淋巴转移都有不同程度的抑制,而在FAK蛋白水平降低后,淋巴转移同样受到抑制,但这三种药物之间的差异并不显著(p>0.05)。注射了 sw-620-sh-Ctrl细胞的裸鼠中,肿瘤通过血液的肝脏转移比较明显,而注射了 sw-620-sh-FAK细胞的裸鼠,肝脏转移略有下降。而在注射有三个药物的裸鼠的肝脏中,肿瘤的转移同样都受到了抑制;肾脏组织中,注射了 sw-620-sh-Ctrl细胞的裸鼠中,肾脏器官中的肾小球发生明显的变化,已经出现了明显的异常,肾小球被实质化,功能受到损害。而注射了 sw-620-sh-FAK细胞的裸鼠,肾组织中也有异常的表现。在注射有三个药物的裸鼠肝脏中,并没有明显的肿瘤的转移,但同样都有肾功能的损伤。肺组织肿瘤的转移并不明显。结论:肿瘤更多的是可以通过淋巴进行转移,也可以通过血液至肝脏转移。三种药物对于肿瘤的转移都有抑制,三种药物作用疗效之间无显著差异。注射了sw-620-sh-Ctrl细胞的裸鼠和sw-620-sh-FAK细胞的裸鼠中,都有不同程度的肾组织损伤。在注射有三种药物的裸鼠的肝脏中,并没有明显的肿瘤的转移,但同样都有肾功能的损伤。肺组织肿瘤的转移并不明显。