【摘 要】
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磷酸三(2-氯乙基)酯(tris(2-chloroethyl)phosphate,TCEP)、磷酸三苯酯(triphenyl phosphate,TPHP)和磷酸三(2-氯丙基)酯(tris(clorisopropyl)phosphate,TCPP)是三种典型的有机磷酸酯类阻燃
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磷酸三(2-氯乙基)酯(tris(2-chloroethyl)phosphate,TCEP)、磷酸三苯酯(triphenyl phosphate,TPHP)和磷酸三(2-氯丙基)酯(tris(clorisopropyl)phosphate,TCPP)是三种典型的有机磷酸酯类阻燃剂,在各种环境介质中经常被检测到。先前的研究表明它们对脊椎动物有毒性作用,但对低营养级水生生物的毒性作用鲜有报道。本研究选用低营养级水生生物嗜热四膜虫(Tetrahymena thermophila)作为实验生物,探讨了TCEP、TPHP和TCPP对嗜热四膜虫的急性毒性。在上述研究基础上进一步通过表型观察、转录组测序分析和实时定量PCR检测,评价了TCEP和TPHP亚慢性暴露对嗜热四膜虫的毒性作用及其分子机制。主要结果如下:1.嗜热四膜虫急性暴露(12 h和18 h)于高浓度的TCEP、TPHP和TCPP后,通过统计种群密度和种群活力,探究三种阻燃剂对嗜热四膜虫的剂量-时间依赖性效应。以种群密度为监测指标发现,TCEP、TPHP和TCPP的12h的半数有效浓度(EC50)分别为19.26、23.46和42.17 mg/L,18h的EC50分别为11.85、17.47和32.27mg/L;以种群活力为监测指标时,TCEP、TPHP和TCPP的12h的EC50分别为13.09、18.04和43.27 mg/L,18h的EC50分别为9.86、9.97和39.09 mg/L。2.暴露于0.05、0.5和5 mg/L TCEP 5天后,嗜热四膜虫的理论种群数量、细胞活力、纤毛数量和细胞大小均呈时间-剂量依赖性下降。同时,RNA-Seq分析显示,5 mg/L TCEP暴露组的嗜热四膜虫中有2932个基因表达水平出现显著变化(上调:1228;下调:1704)。进一步通过KEGG富集分析发现,分别有9、10和17个基因在囊泡运输中的SNARE相互作用、蛋白酶体和内吞作用通路中的表达下调。因此,暴露于高浓度(mg/L量级)的TCEP可能通过下调与囊泡运输、蛋白酶体和内吞作用相关的蛋白的基因转录水平来影响嗜热四膜虫的发育和繁殖。3.嗜热四膜虫暴露于0.05、0.5和5 mg/L TPHP 5天后,显著降低了细胞活力和纤毛数量。此外,暴露于0.5和5 mg/L TPHP显著降低了理论种群数量和细胞大小。同时,通过RNA-Seq鉴定出暴露于5 mg/L TPHP后有4105个基因上调和4487个基因下调。进一步通过KEGG富集分析发现,这些差异基因显著富集于核糖体、剪接体、吞噬体、蛋白酶体和内质网中的蛋白质加工等通路中。因此,高浓度(mg/L量级)的TPHP可能通过影响与细胞周期调控、蛋白质加工和合成利用、生物分子合成和代谢等相关的通路,进而影响嗜热四膜虫的发育和繁殖。
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