论文部分内容阅读
目的:研究制备可注射a FGF/磺化壳寡糖温敏水凝胶并进行评价,建立其质量标准体系,并通过体外PC12神经细胞缺氧损伤模型及大鼠坐骨神经损伤模型研究其对神经损伤的修复作用,同时通过急性毒性试验,生物相容性试验进行了初步安全性评价,为可注射a FGF/磺化壳寡糖温敏水凝胶的应用提供依据。方法:(1)以氯磺酸为磺化试剂进行壳寡糖的定点修饰;(2)采用泊洛沙姆为温敏基质制备a FGF磺化壳寡糖温敏水凝胶。扫描电镜观察其内部围观结构;(3)双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定a FGF的含量,3T3细胞MTT法测定凝胶内a FGF活性;(4)利用连二硫酸钠(Na2S2O4)对PC12细胞进行缺氧损伤,建立细胞损伤模型,研究a FGF磺化壳寡糖温敏水凝胶的神经保护作用;(5)建立坐骨神经损伤大鼠模型,测定机械缩足阈值和热缩足潜伏期研究其对切断的大鼠坐骨神经的修复作用;(6)通过小鼠急性毒性试验、血液相容性试验和小鼠皮下注射的组织相容性试验进行a FGF磺化壳寡糖温敏水凝胶的初步安全性评价。结果:(1)得到磺化壳寡糖,以红外光谱、元素分析、核磁共振等方法对磺化壳寡糖的结构进行分析验证;(2)以泊洛沙姆为温敏材料制备了可注射型a FGF/磺化壳寡糖温敏水凝胶;(3)建立了快速灵敏稳定可靠的ELISA法,成功用于样品中a FGF的含量测定,该方法灵敏度可达到12pg/m L;活性测定采用MTT法进行;初步稳定性实验结果显示所制备的温敏水凝胶在4°C条件下可保持12个月,活性减少在10%范围内;(4)用a FGF溶液及磺化壳寡糖处理的PC12细胞存活率升高,LDH下降;(5)大鼠坐骨神经损伤实验中,给予不同浓度药物后,实验组大鼠的机械缩足阈值和热缩足潜伏期明显变小,高剂量给药组在实验周期内被切断的坐骨神经已完全愈合,说明该药物对坐骨神经损伤具有修复作用;(6)急性毒性试验中,给药组小鼠活动和生长正常,无异常行为和死亡现象;生物相容性试验中,实验组的小鼠在行为活动方面表现正常,未出现烦躁、厌食、体重下降等现象,皮丘部位皮肤正常,未出现红肿、溃烂等炎症现象,HE病理切片结果表明注射部位皮肤组织结构正常。结论:本文按照文献报道对壳寡糖进行了定点磺化修饰,并制备了a FGF/磺化壳寡糖温敏凝胶,并建立了其质量标准。体内外药效学结果表明;a FGF/磺化壳寡糖溶液对Na2S2O4损伤的PC12细胞具有保护作用,a FGF/磺化壳寡糖温敏凝胶对坐骨神经损伤的大鼠有修复作用。初步安全性评价结果表明a FGF/磺化壳寡糖温敏凝胶安全,不会导致溶血,具有较好的生物相容性。