大鼠糖尿病早期近端肾小管葡萄糖转运蛋白2的表达增强

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目的:观察大鼠糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)早期近端小管葡萄糖转运蛋白2(Facilitated Glucose Protein 2,GLUT2)表达的变化,探讨GLUT2与糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)的关系。方法:健康雄性SD大鼠被随机分为正常对照组和糖尿病模型组,模型组以成年健康雄性SD大鼠在禁食12h后一次性腹腔注射STZ,48h后测血糖,以血糖值均≥16.7mmol/L为造模成功;对照组注射同等体积的枸橼酸缓冲液,置代谢笼内监测日饮水量、24h尿量变化;分别于STZ注射后正常喂养1周、2周、4周、6周,至造模成功后分别取两肾,称量两肾的重量及大鼠体重,一肾用于HE染色观察肾脏组织病理学变化、免疫组织化学过氧化物酶连接法测定肾内葡萄糖转运蛋白GLUT2的定位和表达;另一肾迅速置液氮2~3min后,放入—80℃深低温冰箱保存,用差速离心法制备肾小管刷状缘膜(Blush-Border Membrane Vesicle,BBMV),BCA法测定蛋白浓度后行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测,Western blot鉴定GLUT2蛋白并应用图象分析仪进行GLUT2定量。并同时心脏取血测血糖、血胰岛素以及其他指标。结果:1、DM大鼠模型成功建立:所有大鼠血糖均≥16.7mmol/L,与正常对照组相比,糖尿病模型组血糖值明显增高(p<0.01),且大鼠出现三多症状(多食、多饮、多尿),精神萎靡、毛色晦暗、行动迟缓、体重减轻或增长缓慢。试验结果发现:与正常对照组相比,糖尿病模型组肾比重、尿蛋白、血肌酐均明显增加(p<0.05)。2、免疫组织化学染色结果显示:GLUT2主要在近端肾小管表达,与正常对照组相比,糖尿病各模型组近端肾小管GLUT2蛋白表达显著升高(p<0.01),灰度值评分降低(染色加深),其中各糖尿病模型组之间也有差异:与1周组、2周组的表达量相比,4周组显著性增高,差异有统计学意义(p<0.05);与4周组相比,6周组近端肾小管GLUT2蛋白量显著性降低,差异有统计学意义(p<0.05)。而与1周和2周组相比,6周组近端肾小管GLUT2蛋白量无明显差异(p>0.05),但仍然高于正常对照组(p<0.05)。3、Western blot结果显示:正常对照组GLUT2有微弱表达,与正常对照组相比,糖尿病模型组近端肾小管GLUT2蛋白表达显著性增加(p<0.01),其中糖尿病模型组之间也有差异:白糖尿病模型1周组开始GLUT2蛋白在近端肾小管呈明显阳性,表达开始升高,在糖尿病4周组时近端肾小管GLUT2的表达达到峰值,而6周有下降趋势;与1周组、2周组糖尿病大鼠近端肾小管GLUT2表达量相比,4周组糖尿病大鼠肾GLUT2表达量显著性增加(p<0.05);与4周组糖尿病大鼠肾GLUT2相比,6周组糖尿病大鼠近端肾小管GLUT2明显降低(p<0.05),而与1周组、2周组相比6周组近端肾小管GLUT2的表达无显著差异(p>0.05),但仍然明显高于正常对照组近端肾小管GLUT2的表达(p<0.05)。4、大鼠糖尿病早期近端肾小管GLUT2灰度值与血清胰岛素含量成正相关(r=0.982,p<0.01);与血糖值成负相关(r=-0.871,p<0.05)。结论:1、大鼠1型糖尿病模型早期近端肾小管GLUT2蛋白的表达增高,糖尿病早期的发病过程包含了GLUT2表达的增强这一因素。2、大鼠糖尿病早期近端肾小管GLUT2蛋白的表达有时间依赖性,1周组时近端肾小管GLUT2蛋白在DM大鼠表达增高,至4周组时达高峰,而6周组稍有下降。3、大鼠糖尿病早期近端肾小管GLUT2蛋白含量与血清胰岛素水平成负相关,与血糖值成正相关。
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