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本研究在本科室自行研制成功的国内首株激发型抗人CD40单克隆抗体（5C11）的基础上，采用经典的嵌合抗体构建方法，对其进行基因工程改造，并在CHO细胞中实现真核表达，进而对其生物学活性进行初步的研究，以期获得能持续有效分泌特异性的抗人CD40人-鼠嵌合抗体的稳定细胞株，为靶向CD40分子的肿瘤免疫治疗提供必要的物质基础，也期在治疗性单抗的研发领域中取得突破。 第一部分首先采用RT-PCR从特异性分泌抗人CD40单克隆抗体的杂交瘤细胞株5C11中提取总RNA，常规逆转录，应用简并引物进行PCR扩增，并根据重、轻链基因序列分析结果设计引物，应用SMART-PCR方法扩增含信号肽序列的VH和VL基因，进行测序鉴定。同时采用RT-PCR从人脾脏细胞中抽提总RNA，分别设计特异性引物扩增人IgG1gamma链huFc、huCH1基因和κappa链恒定区基因huCκ，再利用TP-PCR方法将huFc和huCH1进行拼接得到人IgG1gamma（CH1-CH3）链恒定区基因，测序鉴定。将含信号肽序列的VH序列和人的IgG1重链恒定区序列进行拼接获得嵌合重链，将含信号肽序列的VL序列和人的κappa链恒定区序列进行拼接获得嵌合轻链，拼接产物测序鉴定，构建共表达嵌合重、轻链的重组质粒pIRES／hu5C11。pIRES／hu5C11重组质粒用脂质体法转染293T细胞，利用CD40-L929和mock-L929细胞株，通过流式细胞术对293T细胞瞬时表达上清中抗人CD40人-鼠嵌合抗体进行鉴定。结果显示，本研究成功构建了含人-鼠嵌合重链和嵌合轻链基因的抗人CD40人-鼠嵌合抗体真核表达载体pIRES／huSC11。 第二部分选择中国仓鼠卵巢细胞（CHO）作为表达宿主，经试剂盒抽提的pIRES／hu5C11嵌合抗体重组表达质粒用脂质体法转染CHO细胞，获得持续稳定分泌表达抗人CD40人-鼠嵌合抗体（ch-SC11）的基因转染细胞株（hu5C11-CHO）。RT-PCR鉴定结果表明ch-SC11表达基因成功整合在huSC11-CHO细胞中；FCM和Western blot结果表明，转染pIRES／hu5C11质粒的CHO培养上清中含有抗人CD40人-鼠嵌合抗体，其不仅保留了特异识别CD40分子活性，并且含人免疫球蛋白Fc