第一部分 川芎嗪对免疫介导的骨髓衰竭小鼠骨髓损伤的影响研究背景随着工业化及老龄化进程的加快,目前我国再生障碍性贫血(AA)患者越来越多。国内外大量研究证实免疫介导的骨髓衰竭(BMF)模型为最接近重型再生障碍性贫血(SAA)发病机制的动物模型,并且据文献报道川芎嗪(TMP)具有改善骨髓微环境及减轻细胞凋亡等作用,而TMP能否改善免疫介导的BMF小鼠骨髓损伤尚未见报道。研究目的通过采用射线辐照与淋巴细胞输注建立合适的免疫介导的BMF动物模型,探讨TMP对BMF小鼠骨髓损伤的影响,为中药治疗SAA提供新的靶点和实验依据。方法与结果采用X射线辐照结合同种异型淋巴细胞输注建立免疫介导的BMF小鼠模型。首先,分别给予低(5.0 Gy),中(5.75 Gy),高(6.5 Gy)剂量X射线照射,然后4 h内经尾静脉输注4×106个混合淋巴细胞来诱导BMF模型,记录每只小鼠存活天数,第14天处死小鼠,进行血细胞计数和骨髓病理检测,结果显示三种剂量X射线均可诱导BMF,但是5.0 Gy组存活率较高(存活率80%),BMF程度较轻。因此,选定总剂量5.0 Gy X射线用于后续实验研究。在采用5.0 Gy辐照建模后,每天给予低(5 mg/mL),中(10 mg/mL),高(20 mg/mL)浓度的TMP溶液,第14天处死小鼠,采集外周血和股骨。通过骨髓H&E染色、血细胞检测、骨髓有核细胞计数和免疫荧光检测TMP对BMF的影响。骨髓有核细胞及血细胞计数显示,高浓度TMP溶液能显著增加骨髓有核细胞和红细胞,而低浓度TMP能升高白细胞和血小板。骨髓H&E染色和免疫荧光结果显示,随着TMP浓度的升高,骨髓充血明显改善,有核细胞出现增加,而Fas蛋白表达减少。结论5.0 Gy X射线是建立免疫介导的BMF模型较合适的辐照剂量,有利于SAA实验研究;TMP能改善BMF,起到了“祛瘀生新”作用,可能与抑制Fas表达相关。第二部分 川芎嗪对免疫介导的骨髓衰竭小鼠肾脏氧化应激的影响研究背景免疫介导的骨髓衰竭(BMF)模型被认为是最接近SAA发病机制的动物模型,并且射线辐照是建立免疫介导的BMF模型必不可少的条件。现代研究表明辐照可引发肾脏氧化应激反应,且贫血会进一步加重肾脏应激损伤,然而在建立BMF模型过程时射线辐照与BMF后严重贫血导致的肾脏氧化应激损伤还未见报道。现代研究报道TMP具有抗氧化作用,然而TMP能否抑制BMF小鼠肾脏氧化应激还不确定。研究目的研究TMP对免疫介导的BMF小鼠肾脏氧化应激反应的影响及可能机制,为TMP的肾脏保护作用提供实验数据支持,以拓展TMP的应用。方法与结果建立免疫介导的BMF模型后,每天给与低(5 mg/ml),中(10 mg/ml),高(20 mg/ml)剂量TMP溶液,第14天处理小鼠,鉴定成功建立免疫介导的BMF模型后,通过肾脏H&E染色、氧化应激反应相关指标、免疫组化及Western blot探究TMP对BMF小鼠肾脏氧化应激损伤的影响。骨髓H&E染色显示,模型组血细胞计数明显减少,骨髓中存在大量脂肪空泡并且有核细胞减少,表明成功建立免疫介导的BMF模型。肾脏氧化应激反应相关指标显示,模型对照组MDA升高,而GSH、SOD、GSH-Px下降;而经TMP治疗后,MDA下降,GSH、SOD上升;H&E染色显示模型组肾小管存在轻度水肿,而经TMP治疗后,肾脏病理未见明显异常;免疫组化及Western blot结果显示,经TMP治疗后模型小鼠肾脏HIF-1α表达下调,并可见VEGF表达。结论TMP可减轻免疫介导的BMF小鼠模型中肾脏的氧化应激反应,可能涉及HIF-1α/VEGF信号调控。