论文部分内容阅读
目的：
1.根据AA大鼠的关节局部肿胀、多发性关节炎及病理形态学等改变，明确反义uPAR重组质粒对大鼠AA的治疗作用；
2.根据AA大鼠关节滑膜细胞uPAR及VEGF蛋白表达情况，分析反义uPAR重组质粒通过阻断AA大鼠关节滑膜组织uPAR及抑制滑膜组织VEGF蛋白表达发挥治疗效应。
方法：
1．质粒的抽提：应用碱裂解法从细菌保存液(本课题组保留)抽提pcDNA3.1(-)质粒及反义uPAR/pcDNA3.1(-)重组质粒。
2．实验大鼠AA模型的复制、分组及干预：50只雄性SD大鼠适应性饲养一周，按完全随机法将其中8只为正常对照组，不做任何处理，其余42只大鼠左足跖皮内注射完全弗氏佐剂(CFA)诱发大鼠AA模型，模型复制成功后完全随机分为4组，每组8只，为模型对照组、生理盐水治疗组、空质粒治疗组、重组质粒治疗组，后三组踝关节分别注射生理盐水、pcDNA3.1(-)质粒及反义uPAR/pcDNA3.1(-)质粒。
3．结果观察：观察大鼠的一般情况、关节炎指数(AI)，光学显微镜下观察关节滑膜组织病理学变化，免疫组织化学法检测关节滑膜组织uPAR、VEGF蛋白表达情况。
结果：
1．质粒提取：大量提取质粒后，琼脂糖凝胶电泳及全自动紫外分光光度计作浓度、纯度测定，质粒与目的片段大小相符，浓度与纯度正常，质粒抽提成功。
2．大体观察：随着大鼠AA模型免疫时间的延长，模型对照组、生理盐水治疗组、空质粒治疗组AI评分增加较快，重组质粒治疗组AI评分增加缓慢，后期逐渐下降，重组质粒治疗组与模型对照组之间AI评分比较有显著性差异（p<0.01）；
3．HE染色：与正常对照组比较，模型组大鼠滑膜明显增厚，滑膜表层细胞增生明显，滑膜组织有淋巴细胞、单核细胞及少数散在分布的多核巨细胞浸润，新生血管增多，可见血管翳形成，重组质粒治疗组滑膜组织增生较模型组明显减轻、淋巴细胞浸润减少，新生血管减少，血管翳明显减轻。
4．免疫组织化学染色：正常对照组大鼠滑膜组织uPAR、VEGF蛋白无或少量表达，与模型对照组比较有显著性差异（p<0.01）；模型对照组、生理盐水治疗组及空质粒治疗组之间uPAR、VEGF蛋白表达无差异（p>0.05）；重组质粒治疗组与模型对照组、生理盐水治疗组、空质粒治疗组之间uPAR、VEGF蛋白表达有显著性差异（p<0.01）。
结论：
1．反义uPAR表达质粒对AA大鼠关节局部肿胀、多发性关节炎及病理形态学等改变有明显的治疗作用。
2．反义uPAR重组质粒通过阻断滑膜组织uPAR蛋白表达而抑制滑膜组织VEGF蛋白表达，抑制滑膜血管新生，为类风湿关节炎的基因治疗提供理论依据。