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本文的目的利用微生物脂肪酶在非水相介质中高选择性合成1,3-甘油二酯。研究内容包括脂肪酶产生菌的筛选、脂肪酶产生菌的产酶条件优化、脂肪酶产生菌催化反应体系的优化、脂肪酶产生菌的小型发酵罐扩大试验。通过罗丹明B紫外显色法初筛、对硝基苯酚法测定合成酶活第一次复筛及高效液相色谱测定甘油二酯得率及脂肪酶对1,3-甘油二酯选择性第二次复筛，从富油土壤中得到一株产高选择性合成1,3-甘油二酯胞内脂肪酶的菌株GZUF36。对该菌进行形态学、18sRNA序列分析，鉴定为黑曲霉。为节约成本，该菌株所产胞内脂肪酶不必纯化直接做为全细胞脂肪酶。从筛选到的这株黑曲霉GZUF36（CCTCC No. M2012538）出发，优化了其胞内脂肪酶的产酶条件。在单因素试验基础上，采用PB试验设计方法考察7个培养基成分，筛选得出3个关键因素，再利用最陡爬坡试验及Box-Behnken响应面设计确定主要影响因素的最佳浓度，以提高选择性合成1,3-甘油二酯脂肪酶的合成能力，增加甘油二酯的得率。所得最佳培养基成分为：葡萄糖1.03%，豆饼粉1.78%，KCl0.044%，ZnSO40.044%，Na2HPO40.044%，CaCl20.044%和K2HPO40.044%。在此条件下，1,3-甘油二酯产率为26.887%。与优化前相比提高了1.46倍。1,3-甘油二酯在甘油二酯中所占的比例为88.253%。对黑曲霉GZUF36（CCTCC No. M2012538）全细胞脂肪酶选择性催化甘油解反应合成1,3-甘油二酯的反应体系进行了优化，考察的因素有：单一有机介质，混合有机介质，混合有机介质比例，水活度，底物浓度、底物摩尔比，加酶量等。结果表明：当有机介质为正己烷：叔丁醇（V/V=29:1），水活度为0.427，甘油三酯浓度0.02mol/L，甘油与甘油三酯的摩尔比为2:1，加酶量为80mg/mL时，甘油二酯的得率为33.378%，提高了0.18倍，全细胞脂肪酶对1,3-甘油二酯的选择性为88.75%。为了得到大量的全细胞脂肪酶，对黑曲霉GZUF36（CCTCC No. M2012538）进行了5L的小型发酵罐的扩大试验，发酵罐条件为：初始pH值6，温度30℃，转速180，DO1.7%，装液量80%，接种量2%，发酵培养6天。结果显示：当发酵罐培养至第5天时，甘油二酯得率达到最高值25.850%。全细胞脂肪酶对1,3-甘油二酯的选择性也达到88%以上。