人血清白蛋白（Human Serum Albumin,HSA）源自人体最大的脏器-肝脏,在血液中占比最高,主要运输脂肪酸、氨基酸等营养物质,同时能够维持血液渗透压的平衡,稳定血浆内环境。临床上用于医治休克、大面积烧伤,以及大出血导致的血含量降低,同时也是国家的储备药物之一。白蛋白主要通过低温乙醇法和柱层析法从人血浆中获得,原料来源不稳定且易携带各类血液病毒。目前已有多种表达体系生产重组人血清白蛋白（Recombinant Human Serum Albumin,r HSA）,其中毕赤酵母使用较为广泛。本课题以实验室构建的GS115-p PIC9K-hsa-5-4为表达菌株,鉴于有机培养基BMGY罐上发酵时间短,发酵培养基色素多,尝试用无机培养基BSM取代BMGY菌体湿重为500 g/L,诱导192 h目的蛋白的表达量为11.46 g/L,均高于BMGY培养基。选择不同盐浓度的BSM进一步优化培养基,发现1/4 BSM不能满足长时间发酵的营养需求,采用1/2BSM培养基能满足长时间高密度发酵,在诱导192 h后获得17.47 g/L的产量。对发酵获得的重组人血清白蛋白进行纯化,为保证储存中目的蛋白不被降解,首先采用热处理方式将发酵液中蛋白酶灭活,便于后续纯化;随后优化Blue Sepharose亲和层析中上样和洗脱p H,确定最终上样和洗脱p H分别为5和7,目的蛋白纯度达到94.67%;接着Phenyl Sepharose疏水层析能够进一步去除产物中色素和其他杂质,将纯度提高至97.348%,两步纯化的总回收率超过61%。利用Con A亲和填料与多糖的特异性亲和力将目的蛋白与多糖杂质分离,获得产物的回收率是68.91%。借助蒽酮-硫酸检测Con A亲和层析检测前后溶液中多糖（甘露聚糖等）含量的变化,最终溶液中多糖（甘露聚糖等）含量为2.41mg/L,低于同等条件下血浆来源人血清白蛋白（Plasma Human Serum Albumin,p HSA）中多糖的含量（6.59mg/L）。为进一步提高目的蛋白纯度,除去构象不正确的白蛋白,以p HSA为抗原免疫小鼠,通过杂交瘤技术筛选获得一株杂交瘤细胞株7H5,产生的单克隆抗体与p HSA有较强的亲和力,经ELISA检测抗体效价大于10^-5,Western blot验证了纯化的单抗与重组人血清白蛋白具有特异性结合。将该抗体与溴化氢活化的琼脂糖偶联制备针对HSA的免疫亲和层析（Immunoaffinity Chromatography,IAC）柱,回收率为95.95%。r HSA经该亲和柱纯化后使用灵敏度极高的Pichia pastoris Host Cell Proteins Kit检测宿主细胞蛋白含量,计算目的蛋白纯度为99.9666%,总回收率为40.998%。