疱疹病毒(CaHV)引起的急性鲫鳃出血症的病理观察及免疫组化检测

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近年来,急性疱疹病毒性鲫(Carassius auratus)鳃出血病的爆发给中国鲫养殖场造成了严重的损失,本论文以鲫为研究对象,对其肝、脾、肾、鳃及头肾进行组织病理观察及免疫组化检测分析,主要研究结果如下:  (1)急性病毒性鲫鳃出血病的病理变化  电镜观察结果显示病原具有典型疱疹病毒的形态特征,故称之为鲫疱疹病毒(Carassius auratus herpesvirus,CaHV)。经PCR扩增对己知鲤科疱疹病毒主衣壳蛋白(major capsid protein,MCP)基因片段进行了检测,确定CaHV存在于感病鱼的肝、脾、肾及头肾组织中。对病鱼的鳃、肝、脾、肾和头肾组织病理及不同时序病理进行比较分析,结果显示CaHV感染会引起鲫的这些组织出现不同程度的病变,且鳃和头肾的病理变化有着显著的时序相关性。在头肾细胞里观察到大量的CaHV颗粒,预示鲫头肾是CaHV侵染和复制的主要靶器官。  (2)鲫疱疹病毒主衣壳蛋白片段的免疫组化检测  利用已知鲤科疱疹病毒的ORF92基因片段所编码的MCP作为抗原,制备了CaHV-MCP多克隆抗体。Westem blotting检测表明CaHV-MCP多克隆抗体既能识别原核表达的重组蛋白,也可以识别鲫组织中表达的MCP。表明该抗体可以用于CaHV免疫学检测。利用CaHV-MCP多抗对鲫肝、脾、肾、鳃及头肾组织进行免疫组化检测,结果显示这些组织表现不同程度的阳性信号,其中头肾组织阳性信号最强,以不规则块状散在分布。随感染时间的增加,阳性信号周围组织逐渐崩解,并伴随着阳性染色加深。这表明头肾组织中,病毒的粒子不断复制,证实头肾是病毒复制的靶器官。
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