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目的:研究淫羊藿苷(icariin, ICA)对人膀胱癌T24细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响,探讨淫羊藿苷抗肿瘤作用机理,为淫羊藿苷应用于肿瘤化学预防提供理论依据。方法:1采用MTT比色法观察不同浓度淫羊藿苷(0,5,10,20,40,80,160和320μg/ml)作用不同时间(24,48和72h)后,人膀胱癌T24细胞的增殖变化;光镜及瑞氏-姬姆萨染色法观察淫羊藿苷对T24细胞形态学的改变。2用流式细胞技术分析不同浓度淫羊藿苷(0,5,10,20和40μg/ml)作用24h后,对人膀胱癌T24细胞周期和凋亡的影响。3采用Western blot方法分析不同浓度淫羊藿苷(0,5,10,20和40μg/ml)作用24h后,人膀胱癌T24细胞PCNA、Bcl-2和Bax蛋白质表达的影响。4统计学方法:所有数据采用SPSS 16.0软件进行统计学处理。实验结果均以x±S表示,组内比较采用单因素方差分析,多个实验组均数与一个对照组均数比较用Dunnett-t检验,回归方程间比较用t检验与方差分析,以α=0.05或α=0.01为检验水准。结果:1淫羊藿苷抑制人膀胱癌T24细胞增殖: MTT检测结果显示,5,10,20,40,80,160和320μg/ml的淫羊藿苷对T24细胞增殖有明显的抑制作用,与对照组比较有显著性差异(P<0.01),高浓度淫羊藿苷组与低浓度组比较也具有显著差异(P<0.05),抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性(r=0.99,P=0.00),IC50为63.22μg/ml。40μg/ml淫羊藿苷作用24h后,光镜下观察到细胞体积缩小,胞质浓缩,胞核凝聚,位于核周膜,呈新月状。2淫羊藿苷可诱导T24细胞周期阻滞和细胞凋亡:流式细胞术检测结果显示,0,5,10,20和40μg/ml的淫羊藿苷作用T24细胞24h后,G0/G1期细胞显著增多,S期和G2/M期细胞减少(P<0.01)。淫羊藿苷呈剂量依赖性地诱导T24细胞凋亡,40μg/ml的淫羊藿苷作用24 h后,细胞凋亡率(7.07%±0.62%)明显升高,与对照组(1.94%±0.44%)相比有显著性差异(P<0.01)。细胞增殖活性的增殖指数PI值显著降低(P <0.01)。3淫羊藿苷可明显抑制PCNA蛋白质的表达,Bcl-2蛋白质表达下调,Bax蛋白质表达上调:经淫羊藿苷作用24 h后,T24细胞PCNA蛋白质表达水平明显下降(P<0.05),抑制作用呈剂量依赖性(r=0.999,P=0.001)。淫羊藿苷作用于T24细胞后,Bcl-2蛋白质表达下调,Bax蛋白质表达上调,增加Bax/Bcl-2的比值,诱导T24细胞凋亡。结论:淫羊藿苷可明显抑制T24细胞增殖,诱导细胞凋亡,将T24细胞周期阻滞于G0/G1期。淫羊藿苷可明显抑制PCNA蛋白的表达,Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,诱导T24细胞凋亡。