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班氏跳小蜂(Aenasius bambawalei Hayat)是入侵性害虫扶桑绵粉蚧的重要寄生性天敌,对扶桑绵粉蚧有较好的防治潜能,但该寄生蜂的寄主定位机制尚不清楚。一般认为,昆虫气味结合蛋白(Odorant binding proteins,OBPs)对运输气味分子具有重要作用。如果能够明确班氏跳小蜂OBPs与相关气味分子的结合特性,将对解析该蜂的寄主定位机制提供理论基础。本研究以班氏跳小蜂为研究对象,在已获得的转录组数据的基础上,对AbamOBP17和Abam OBP28基因进行克隆和表达量测定;进一步对AbamOBP17和Abam OBP28进行体外纯化并获得重组纯蛋白;在此基础上进行AbamOBP17和Abam OBP28与27种棉花挥发物的荧光竞争性结合实验;然后进行AbamOBP17和Abam OBP28与8种挥发物的圆二色谱分析;最后通过Y型嗅觉仪和RNA干扰技术,筛选获得了对该蜂具有行为活性的物质。研究结果为探索Abam OBPs的功能提供了理论依据。主要研究结果如下:1.班氏跳小蜂Abam OBPs基因克隆和表达量测定利用RT-PCR技术成功克隆AbamOBP17和Abam OBP28两个基因。AbamOBP17基因开放阅读框是357 bp,编码118个氨基酸;Abam OBP28基因开放阅读框是402bp,编码133个氨基酸。AbamOBP17属于Minus-C OBPs,信号肽为28个氨基酸残基,Abam OBP28属于Classical OBPs,信号肽为18个氨基酸残基。利用q PCR对这两个基因在不同部位的表达量进行测定,时期为班氏跳小蜂雌雄成虫羽化第一天未交配,部位为头、胸、腹、足、翅、触角6个部位。结果表明:AbamOBP17和Abam OBP28基因在各组织部位均有表达,AbamOBP17基因在雄成虫头部的表达量最高,雌成虫头部、雌成虫翅部和雄成虫翅部次之,其它部位表达量较低;而Abam OBP28基因在雌成虫触角和翅部的表达量最高,雄成虫触角、雄成虫翅部和雌成虫头部次之,其它部位表达量较低。2.班氏跳小蜂Abam OBPs的表达纯化和结合特性分析构建重组质粒pET32b-AbamOBP17和pET32b-Abam OBP28,原核表达结果显示,两个蛋白均在上清大量表达,用镍柱亲和层析法获得AbamOBP17和Abam OBP28的纯蛋白。用荧光竞争性结合实验研究了AbamOBP17和Abam OBP28与27种棉花挥发物的结合能力,结果表明:Abam OBP28与26种棉花挥发物都有结合能力,并且,Abam OBP28与配体的结合能力强弱主要受配体种类而非p H值影响,而AbamOBP17只与癸二酸二乙酯有结合能力。对荧光竞争性结合实验结果进行分析,筛选在p H 7.4条件下具有强结合能力的8种配体进行圆二色谱分析,结果表明:Abam OBPs的α螺旋数和构象均会随着外界p H值的变化而变化;Abam OBPs与配体结合过程中α螺旋数也出现显著变化,这会影响蛋白的构象;Abam OBPs与配体结合获得的圆二色光谱不同于普通OBPs,出现了“红移”现象。3.行为活性物质的筛选及AbamOBP17功能验证筛选了与Abam OBPs具有较强结合能力的三种物质:1-辛烯-3-酮,癸二酸二乙酯和2,4,4-三甲基-2-戊烯。行为学实验结果表明:班氏跳小蜂雌成虫对1%和1‰浓度的癸二酸二乙酯均无行为反应,而雄成虫对两种浓度的癸二酸二乙酯均表现出明显的偏好性;雌雄成虫对1%和1‰浓度的1-辛烯-3-酮均无行为反应;1%的2,4,4-三甲基-2-戊烯对雌成虫有明显的趋避作用,而1‰的2,4,4-三甲基-2-戊烯对雌成虫有明显的吸引作用;两种浓度的2,4,4-三甲基-2-戊烯对雄成虫均有明显的吸引作用。RNAi结果表明:对班氏跳小蜂雄成虫注射ds AbamOBP17,48 h和72 h后,对头部进行取样进行q PCR,结果表明,AbamOBP17基因在雄虫头部的表达量显著性降低,再通过Y型嗅觉仪进行行为验证,发现1%浓度癸二酸二乙酯对雄成虫的吸引作用消失,表明该物质对雄虫定向行为具有重要作用。所以,本研究成功筛选出2,4,4-三甲基-2-戊烯和癸二酸二乙酯两种行为活性物质,并对AbamOBP17的嗅觉功能进行了验证。