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一、重组人促红细胞生成素(rhEPO)对卵巢癌HO-8910细胞表面转铁蛋白受体(TfR)表达的影响目的:通过检测卵巢癌HO-8910细胞表面的与细胞增殖有关的TfR (CD71)在rhEPO干预前后的表达情况,来探讨rhEPO对肿瘤细胞增殖的影响,从而为临床应用rhEPO治疗肿瘤相关性贫血提供一定的实验依据。方法:HO-8910细胞在复苏后用RMPI-1640培养基加10%胎牛血清在37℃,5%CO2环境下常规培养,稳定传代2d后备用。随机取6瓶瓶底壁长满细胞的培养瓶,分别加入含有浓度为50、100、200U/mL的rhEPO的培养基继续培养,作为实验组;同时以2瓶没有加rhEPO的HO-8910细胞作为对照组。分别于48h和72h,收集各瓶细胞,用RT-PCR法检测经不同浓度的rhEPO处理后的和未经rhEPO处理的HO-8910细胞表面的TfRmRNA表达情况。结果:1)两处理因素(rhEPO和时间)的主效应均有统计学意义(P<0.01),二者之间存在交互作用(P<0.01)。2)各组不同时间TfRmRNA表达水平:48h时,50U/mL组TfRmRNA表达水平较对照组明显降低(0.878±0.016 vs 1.128±0.017,P<0.01),100U/mL组较对照组也降低(0.954±0.047 vs 1.128±0.017,P<0.01),200U/mL组较对照组略降低(1.029±0.041 vs 1.128±0.017,P<0.01),不同浓度的各实验组之间没有统计学差异;72h时,50U/mL组TfRmRNA表达水平较对照组明显降低(1.443±0.047 vs 2.127±0.034,P<0.01),100U/mL组较对照组也明显降低(1.446±0.034 vs 2.127±0.034,P<0.01),200U/mL组较对照组同样明显降低(1.430±0.016 vs 2.127±0.034,P<0.01),不同浓度的各实验组之间的差异没有统计学意义。不同作用时间段比较:同一浓度的rhEPO作用72h后, TfRmRNA的表达较48h时有所升高。结论:卵巢癌HO-8910细胞表面有TfR的表达,并且经高浓度的rhEPO处理48h和72h后,TfR的表达均较对照组有所减少,但同一时间点各实验组之间的差异没有统计学意义。这一结论提示了rhEPO不仅不会促进卵巢癌HO-8910细胞的生长,反而通过减少TfR的表达直接或间接抑制了卵巢癌HO-8910细胞的生长、增殖。二、rhEPO对卵巢癌HO-8910细胞周期的影响目的:通过检测rhEPO干预前后卵巢癌HO-8910细胞的细胞周期情况,来探讨rhEPO对肿瘤细胞增殖的影响,评价其在肿瘤相关性贫血中的治疗价值。方法:仍以HO-8910细胞作为研究对象,常规培养、稳定传代2d后随机取6瓶瓶底壁长满细胞的培养瓶,加入含有浓度分别为50、100、200U/mL的rhEPO的培养基继续培养,作为实验组。同时以2瓶没有加rhEPO的HO-8910细胞作为对照组。分别于48h和72h后,用离心沉淀法收集各培养瓶中的细胞,按照流式细胞仪检测细胞周期专用试剂盒的操作说明,送流式细胞仪进行细胞周期的测定。结果:1)两处理因素(rhEPO和时间)的主效应均有统计学意义(P<0.01),二者之间存在交互作用(P<0.01)。2)各组不同时间S期细胞百分率(%):48h时,50U/mL组S期细胞百分率较对照组明显降低(28.21±0.09 vs 32.42±0.14,P<0.01),100U/mL组较对照组也明显降低(28.19±0.08 vs 32.42±0.14,P<0.01),200U/mL组较对照组同样也降低(28.24±0.09 vs 32.42±0.14,P<0.01),不同浓度的各实验组之间没有统计学意义;72h时,50U/mL组较对照组明显降低(31.58±0.09 vs 33.99±0.07,P<0.01),100U/mL组较对照组也明显降低(31.65±0.07 vs 33.99±0.07,P<0.01),200U/mL组较对照组同样明显降低(31.59±0.42 vs 33.99±0.07,P<0.01),不同浓度的各实验组之间的差异没有统计学意义。不同作用时间段比较:同一浓度的rhEPO作用72h后,S期细胞百分率较48h时有所升高。结论:卵巢癌HO-8910细胞经高浓度的rhEPO处理后,无论48h还是72h,各实验组的S期细胞百分率较对照组明显降低,但同一时间点各实验组之间的差异没有统计学意义。这进一步证实了rhEPO不仅不会促进卵巢癌HO-8910细胞的生长,反而通过影响细胞周期的进程抑制了卵巢癌HO-8910细胞的生长、增殖。