肝损伤是多种肝脏疾病共有的一种病理变化,其长期存在往往是导致肝纤维化,甚至肝硬化、肝癌发生的重要始动因素。因此防治肝损伤是临床肝病治疗的主要环节之一。肝损伤机制复杂,随着现代医学的发展,对肝损伤的认识已进入到细胞分子水平,对中医防治肝损伤作用机制的认识也由保护肝细胞膜、降低转氨酶等浅层面逐渐深入。近年来的研究表明,相比其他机制来讲,细胞凋亡在肝细胞损伤中发挥着更为重要的作用。当前肝损伤凋亡机理研究当中的一个重要研究内容,而中医药在此方向的研究较为分散,尚未形成体系。本课题疏肝清毒汤中柴胡、丹参、赤芍、三七粉疏肝解郁,调理气血,凉血化瘀；白芍养肝柔肝；白花蛇舌草、鸡骨草、三叶香茶菜清热化浊解毒；其中三叶香茶菜,具有清热解毒,退黄利湿之功效；而鸡骨草具有清热解毒,疏肝止痛之功效,是临床治疗肝炎的常用中药。上述诸药多具有保肝降酶、抗炎抗病毒的作用,柴胡、三叶香茶菜具有调整机体免疫功能,促进肝细胞再生,抗肝纤维化的作用；丹参、赤芍、三七粉还具有改善肝脏微循环,清除免疫复合物,抑制纤维组织增生的作用。根据中医防治肝损伤作用机制研究趋势,以刀豆蛋白、卡介苗加脂多糖、D-氨基半乳糖所致肝损伤模型,评价疏肝清毒汤的抗肝损伤作用,并通过对信号通路调节相关基因及其表达的检测,探索疏肝清毒汤对小鼠肝损伤中肝细胞凋亡细胞信号通路调节的作用机制。1. ConA致肝损伤：动物随机分6组,除正常对照组外,其余小鼠尾静脉注射ConA20mg/kg后,分别于首日上、下午和次日下午各灌胃给药一次。末次给药后4-6h模型组和给药组动物一次性尾静脉注射ConA20mg/kg。12h后,摘眼球取血,断头处死动物,并分离血清测SOD、MDA、GSH和NO,取肝脏标本作病理切片,并拍照。结果显示：与正常对照组比较,模型对照组ALT显著升高(P<0.01),说明造模成功。联苯双酯、疏肝清毒汤大、中、小剂量均对ALT有降低趋势,尤以中剂量组最为显著(P<0.01)。疏肝清毒汤小鼠IFN-γ和TNF-α含量均明显低于模型组,差异有显著性意义(P<0.01)。2.卡介苗+脂多糖所致肝损伤：以卡介苗+脂多糖所致肝损伤小鼠为动物模型,空白对照组不造模,尾静脉注射生理盐水。各组均每天灌胃1次,共灌胃10天。测定血清ALT和AST含量,测定肝组织SOD、MDA、GSH、NO含量。结果显示：模型组血清ALT、AST均非常显著性升高,与空白组比较(P<0.01)。疏肝清毒汤大剂量组的降酶效果与联苯双酯相当。疏肝清毒汤各剂量组均有明显升高免疫性损伤肝组织已降低的SOD含量。疏肝清毒汤各剂量组和联苯双酯组均可显著降低已升高的免疫性肝损伤小鼠肝组织的MDA含量,。联苯双酯组和疏肝清毒汤大、中、小剂量均能降低肝组织NO含量(P<0.05)。3.D-氨基半乳糖所致肝损伤的保护作用：将NIH小鼠60只分为6组,给药治疗共7天,第6天,模型组和治疗组按0.5g／kg剂量腹腔注射D-氨基半乳糖,建立D-氨基半乳糖致小鼠肝损伤的动物模型。通过对肝损伤小鼠的ALT、AST、SOD、MDA、NO、Fas及FasL基因mRNA表达以及肝组织病理检查等指标的检测。结果显示：疏肝清毒汤对D-氨基半乳糖诱导的小鼠急性肝损伤模型,具有明显的保护作用,能显著增强SOD活力,降低MDA的水平,肝组织病理变化减轻。此外,疏肝清毒汤还能降低NO水平,减少Fas和FasL的表达。4.对小鼠免疫系统调节作用的研究：(1)对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响结果显示：模型组吞噬指数和吞噬系数与正常对照组比较(P<0.01),说明造模成功。疏肝清毒汤对环磷酰胺致小鼠细胞免疫抑制作用有不同程度的对抗作用,能使免疫功能低下小鼠吞噬指数和吞噬系数得到恢复。(2)对鸡红细胞诱导的循环抗体水平的影响结果显示：环磷酰胺能显著降低小鼠血清溶血素抗体生成能力(P<0.01),说明造模成功。疏肝清毒汤的大剂量组对环磷酰胺所致的小鼠体液免疫抑制作用表现出增强的趋势,其余两个剂量组反应较弱；左旋咪唑作用较显著(P<0.01)。本课题应用疏肝清毒汤对多种原因所致小鼠肝损伤有明显的保护作用,并能通过显著的降酶、抗氧自由基、抑制脂质过氧化及调节体内免疫功能发挥其抗肝损伤作用。并通过降低NO、上调Bcl-2/Bax,抑制细胞内通路,减少Fas和FasL的表达,抑制细胞外通路凋亡信号,减少细胞凋亡,从而发挥其保护肝损伤、抑制肝细胞凋亡的作用。这为今后中医药防治肝损伤的研究提供新的思路,并为进一步开发和研究传统方剂打下初步的基础。