【摘 要】
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卵泡是卵巢的基本结构和功能单位,其主要功能是排卵和分泌激素。卵泡内颗粒细胞的过度凋亡会诱导卵泡闭锁,降低雌性动物发情频率,从而影响雌性动物生产力。组蛋白H3第4位上的赖氨酸的三甲基化（Tri-methylation of Histone H3 lysine 4,H3K4me3）通过改变组蛋白与DNA的结合能力,促进基因的转录。为探索H3K4me3对母猪卵泡发育的影响机制,本研究首先利用H3K4me
【基金项目】
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国家自然科学基金（31201771）； 现代农业产业技术体系（CARS-36）项目；
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卵泡是卵巢的基本结构和功能单位,其主要功能是排卵和分泌激素。卵泡内颗粒细胞的过度凋亡会诱导卵泡闭锁,降低雌性动物发情频率,从而影响雌性动物生产力。组蛋白H3第4位上的赖氨酸的三甲基化（Tri-methylation of Histone H3 lysine 4,H3K4me3）通过改变组蛋白与DNA的结合能力,促进基因的转录。为探索H3K4me3对母猪卵泡发育的影响机制,本研究首先利用H3K4me3的抑制剂（BCl-121）和激动剂（PBIT）处理母猪卵巢颗粒细胞（Porcine granulosa cells,p GCs）,采用Ed U、CCK-8、Annexin V-FITC、Caspase3/7、Western Blot等实验技术,研究不同程度的H3K4me3对p GCs增殖、凋亡、周期等的影响。随后对3～5和7～10 mm两种大小的卵泡进行Ch IP-Seq,筛选出启动子区H3K4me3富集程度具有显著差异的RBP1和RSPO3基因,构建RBP1/RSPO3基因的过表达载体并设计干扰片段,探究RBP1/RSPO3基因对p GCs功能的影响。最后小鼠活体注射H3K4me3药物,探究不同程度的H3K4me3对小鼠血液中性腺激素浓度的影响。本研究主要结果如下:（1）H3K4me3在大、中和小卵泡中含量存在差异,H3K4me3能够促进p GCs增殖,抑制p GCs凋亡,降低阻滞于G0/G1期p GCs比例,促进p GCs分泌E2。（2）过表达RBP1/RSPO3基因,能显著促进p GCs增殖,抑制p GCs凋亡;干扰RBP1/RSPO3的表达能显著抑制p GCs增殖,促进p GCs凋亡。（3）与对照组相比,抑制小鼠体内H3K4me3程度,能够降低42日龄小鼠血液中Gn RH含量,降低35和42日龄小鼠血液中LH和FSH含量。促进小鼠体内H3K4me3程度,能够升高42日龄小鼠血液中Gn RH含量,升高35、42及49日龄小鼠血液中E2含量。当小鼠达到体成熟（49日龄）,抑制或促进H3K4me3程度将不能显著影响小鼠血液中Gn RH、LH和FSH含量。综上所述,H3K4me3能够促进p GCs增殖,抑制p GCs凋亡,降低阻滞于G0/G1期p GCs比例,促进p GCs分泌E2;H3K4me3能够促进RBP1/RSPO3转录,RBP1/RSPO3能够显著促进p GCs的增殖,抑制p GCs的凋亡;H3K4me3能够影响小鼠血液中性腺激素的含量。该研究为解析H3K4me3及H3K4me3-RBP1/RSPO3调控哺乳动物卵巢卵泡发育机制奠定一定的基础。
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