【摘 要】
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黄曲霉菌及其次生代谢产物—黄曲霉毒素对农业发展和人类健康构成严重威胁,研究其中关键蛋白的结构与功能不仅对食品安全的维护具有极其重要的实际意义,还将对黄曲霉生长机制
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黄曲霉菌及其次生代谢产物—黄曲霉毒素对农业发展和人类健康构成严重威胁,研究其中关键蛋白的结构与功能不仅对食品安全的维护具有极其重要的实际意义,还将对黄曲霉生长机制的研究提供理论基础,并为寻找黄曲霉抑制剂提供帮助,具有重要的生物学意义。核苷二磷酸激酶(Nucleoside Diphosphate Kinase,NDK)在生物体内能够通过催化核苷三磷酸和核苷二磷酸之间高能磷酸键来平衡细胞内核苷三磷酸水平,并且该蛋白在不同生物体内执行不同的生物学功能。本研究发现核苷二磷酸激酶是涉及黄曲霉孢子生长调控的关键蛋白:(1)体内研究表明黄曲霉菌ndk基因存在双拷贝现象。本研究通过同源重组的方法获得黄曲霉菌ndk单拷贝基因的敲除株,该敲除株的孢子产量和分生孢子梗的生长发生了显著变化。(2)本研究发现齐多夫定(AZT)在体外抑制NDK蛋白活性,并抑制黄曲霉孢子和孢子梗的生成。(3)本研究还重组表达并纯化了黄曲霉菌NDK蛋白,获得了 2.4 A分辨率的蛋白晶体数据。通过结构计算分析表明NDK蛋白呈现不对称的二十五聚体空间构象。综上所述,本研究发现黄曲霉菌的NDK蛋白是参与孢子合成的关键蛋白,AZT可作用于黄曲霉菌的NDK蛋白靶点,并可能成为一种黄曲霉潜在的抑制剂。
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