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磺胺二甲嘧啶(SM2)残留对机体可产生多种直接和间接危害,目前,残留物的检测方法主要包括生物效应测定法、理化检测方法、高效液相色谱法、质谱法、气质/液质联用技术、免疫学检测方法及生物传感器检测法等,但不论传统常规检测法还是标准精确检测法普遍存在检测目标单一、操作步骤的繁杂,成本和仪器昂贵,尤其对多种未知污染物同时检测时,工作量繁多、费时耗力等缺点就暴露无疑,对快速、灵敏的检测技术的需要也与日俱增。本研究以SM2开展免疫学检测方法的研究,同时探讨单链抗体在残留药物快速检测中的应用前景,为我国畜禽进出口的快速检测提供了可靠的方法基础。SM2的两种竞争抑制ELISA检测方法的建立对于SM2两种检测方法的回归方程和相关系数为:y=-26.728x+100.54,R2=0.9958和y=-28.049x+105.7,R2=0.9954,线性范围分别为0.67~210ng/L和1.53~620ng/L,对SM2的最低检出浓度为4.9ng/L和5.4ng/L。利用所建立的两种ELISA方法对鸡肉模拟样品进行了检测,其检测样品的回收率分别为99.331 %和88.687%。SM2的高效液相检测方法的检测HPLC法标准曲线回归方程为y=0.0003x-3.799,相关系数R2为0.9998,SM2测量的线性范围为0.049ng/mL~500ng/mL。标准回收率平均值为93.7%。鸡的肌肉和肝脏样品在添加0.5~0.125μg/g SM2时,其ELISA法平均回收率大于85%,HPLC法很好地对ELISA检测结果进行了确证。SM2的单链抗体基因的组装、表达及活性测定RT-PCR技术分别SM2 5D7的杂交瘤细胞株总RNA中扩增抗体的重链和轻链可变区基因,SOE-PCR法组装单链抗体基因(VH-Linker-VL),与pMD18-T载体克隆,测序SM2-ScFv为774bp、编码258个AA,其中重轻链间均为15个AA的柔性Linker连接。多种生物软件预测分析蛋白功能后,同时将重组单链抗体SM2-ScFv在原核载体pET-22b(+)中表达,进一步分析单链抗体在免疫学活性上的变化以及比较与单克隆抗体免疫学活性上的差异。