高压引起大肠杆菌泄露蛋白的研究

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高压生物学是一门研究极端环境下生命活动规律的学科,并作为一种新的生物技术手段逐渐被应用于食品科学、基础生命科学以及医学的各个领域。作为一种应激刺激,高压对生物体从整体水平到分子水平都能产生广泛的影响,已有的研究表明,高静水压能改变细胞形态、细胞膜通透性、蛋白质高级结构等。目前研究主要集中在以下,第一、高压应用于食品科学,可作为一种有效的食品保鲜手段。通过对高压灭菌机理的研究,已有的实验证据将高压灭菌的作用靶点缩小到细胞膜、蛋白质结构以及DNA结构上,研究者发现高压能引起膜通透性改变,蛋白质和DNA的凝集,这些变化都有可能与细菌死亡直接相关;第二、高压应用于疫苗的制备,压力能引起病毒以及病源微生物感染活力的降低,但是能够保留它们的免疫原性,诱导被免疫动物的免疫应答,比常规疫苗制备手段具有一定的优势。第三、高压对蛋白质高级结构的研究,压力一方面能使蛋白质部分变性,因而可以用于蛋白折叠动力学的研究,另一方面压力可以诱导包涵体复性,从而用于重组蛋白的分离纯化。第四、压力作为应激手段可以用于细胞信号通路的研究包括诱导细胞凋亡,对转座子的激活作用等。近期有报道显示一定强度内的高静水压力能引起大肠杆菌胞内蛋白质的泄漏,而细胞膜结构与功能的完整性并未被破坏。这种蛋白质泄漏具有特异性,并且蛋白质泄漏的种类、浓度与压力相关。但是对于不同压力下蛋白质泄漏的特异性即蛋白质组成成分并未进一步分析,并且这种特异性产生的机理并未做出合理阐释。本文通过一维电泳的方法证明压力引起的蛋白质泄露不同于细胞裂解,泄露蛋白的组成具有特异性,这表明蛋白质有选择性的被泄露至细胞外。我们进一步通过二维电泳分析压力泄露蛋白的组成,对压力引起的泄露蛋白进行分析,通过对数据的统计计算,我们排除了等电点、分子量以及蛋白丰度对于特定压力下蛋白能否泄露的作用。我们对部分泄露蛋白点进行分析鉴定,质谱结果证明我们实验结果的可信性,并且已完成的质谱结果显示,蛋白质在细胞中所处位置以及状态可能是蛋白能否泄露的原因,后续实验正在进行中,以进一步证明我们的推断。此外压力应用于包涵体蛋白复性的商品化,表明了高静水压手段在食品灭菌之外的巨大应用。我们对于压力引起蛋白质特异性泄露的研究可能对于高静水压在其它方面的应用具有一定的指导意义。
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