【摘 要】
：
单葡萄糖醛酸基甘草次酸(Glycyrrhetinic acid monoglucuronide,GAMG)属于齐墩果烷(oleanane)型三萜皂苷,是由五环三萜的甘草次酸(GA)与葡萄酸醛酸通过β-1,3糖苷键相连构成,
论文部分内容阅读
单葡萄糖醛酸基甘草次酸(Glycyrrhetinic acid monoglucuronide,GAMG)属于齐墩果烷(oleanane)型三萜皂苷,是由五环三萜的甘草次酸(GA)与葡萄酸醛酸通过β-1,3糖苷键相连构成,研究表明其具有保肝护肝、杀菌、抗病毒、消炎等作用,可用于医药、食品工业及化妆品等领域,同时GAMG还是一种天然甜味剂,其甜度是蔗糖的941倍,极具开发潜力。目前GAMG主要依靠从甘草中提取的甘草酸(GL)经一步酶解得到。目前酶法生产GAMG存在的问题主要是:反应体积大,耗费大量空间成本;微生物生长和产酶过程存在底物选择上的矛盾;β-葡萄糖醛酸苷酶普遍存在酶活偏低副反应较多的问题,目的产物GAMG的得率不高。使GAMG的大量生产受到限制。课题组前期从嗜松篮状菌(Talaromyces pinophilum)中分离得到一种β-葡萄糖醛酸苷酶(TpGUS),可以特异性地将GL水解得到GAMG,为使TpGUS更适用于实际工业生产,本论文对TpGUS水解GL生成GAMG进行了底物识别机制的研究,TpGUS热稳定性改造及耐热突变体发酵工艺优化,主要研究结果如下:提高TpGUS的热稳定性,采用截除N端柔性区段,序列中部柔性区段构建突变体库,精氨酸替换提高TIM-barrel桶状结构域稳定性等方法获得突变体N23-C238RT220RV213RV348R-S195I,其与野生型相比,在55℃条件下,半衰期T1/2m较野生型延长100 min,为野生型的3倍,在70℃条件下,半衰期T1/2m较野生型延长25 min,为野生型的2.3倍。突变体的动力学参数Kcat/Km与原始酶接近,圆二色谱及荧光光谱测定表明其二级、三级结构并未发生较大变化,表明该突变体的热稳定性提高主要原因为引入突变。在TIM-barrel桶状结构域表面合适位置引入精氨酸可以提高蛋白质的热稳定性,还可保持其催化效率不发生大的变化。通过同源建模及实验验证解释TpGUS与底物GL的结合机理。认为TpGUS的H365,Y372和C331对GL的糖头识别起主要作用,S330与甘草酸的母核11号碳位置形成离子键,其与M277,G278,A279,N280构成局部疏水区,对苷元的识别起主要作用。N191,S195,H274,Y276和S330构成糖头进入TpGUS的通道。设计适应于TpGUS耐热突变体的高温转化工艺。在提高产酶量部分通过优化菌体培养条件为32℃,220 rpm,每24 h补加葡萄糖至终浓度10 g/L以提高菌体产酶量由0.42U/ml至10 U/ml,提高了 23倍。在高温转化部分通过对酶与底物最佳比为1:3,最佳转速250 rpm,酶与底物pH控制为4.5,粗酶液与底物GL在50℃条件下直接反应,132小时内经过三次补加底物共30 g,最终得到GAMG20.2 g,最后得到甘草酸的转化率为87%,与传统方法获得等量产物工艺相比,产量为原先的150%,反应时间缩短了一半。此工艺操作时间短,转化率和得率高,重现性好,可为后续实现酶法高效生产GAMG提供依据。
其他文献
软件测试贯穿于软件的整个生命周期,是保证和提高软件质量的重要手段。软件测试面临一个挑战问题—测试Oracle问题,即测试人员难以构造待测程序的预期输出,因此无法判定待测
M型磁铅石型锶铁氧体(Sr Fe12O19,SrM)因其具有良好的矫顽力(Hc)和良好的化学稳定性等优点得到很高的应用普及。目前,研究者们一直致力于SrM铁氧体及其复合材料的制备和磁性能研究。本文采用水热法制备SrM铁氧体、CoFe2O4铁氧体和纳米碳球,采用碳球辅助的方法制备了多孔状的SrM铁氧体,同时利用CoFe2O4铁氧体磁性液体制备了SrM/CoFe2O4复合物,并对样品的结构和磁性能等进
面临能源紧缺以及环境污染困扰,人类迫切需要研发新型绿色能源。铝空气电池具有能量密度高、安全无污染、成本低廉等特点,作为储能电源具有很大的商业潜在价值。但铝阳极材料在放电过程中较低的电化学活性和较差的耐蚀性是制约铝空气电池大规模商业化应用的瓶颈问题之一。本论文研究了铝阳极材料纯度,微量元素(Mg、Zn、Mn、Ga和Sn)添加以及废易拉罐改性制备铝阳极材料对腐蚀、电化学和放电行为的影响,旨在解决铝阳极
传统的成像技术基于香农-奈奎斯特采样定理,该定理认为,采样频率至少为信号频率的两倍,才能恢复数据,但是,这种采样方式采集的数据极其庞大,对光学系统和探测器的要求极高,并且现有的数据处理器无法满足其需求发展,为了解决这一问题,压缩感知理论被提了出来,基于压缩感知的成像技术仅仅需要采集少量的数据,通过某种重构算法就能恢复大量数据。但随着成像领域对光谱分辨率要求的进一步提高,这对成像系统硬件提出了更高的
针对“遥感卫星设计系统”中卫星零部件间的自动拼接这一工程问题,需要实现一种自动拼接方法,并尽可能减少人工对拼接过程的干预。现有的技术中,有两种典型的应用:虚拟装配技
汽车工业是我国的支柱型产业,在国民经济中占据重要地位。当前,由于国内外经济环境的变化,汽车行业的市场环境日趋严峻、企业竞争更加激烈,缩减成本、提高效率成为企业发展的重要问题。近年来,汽车行业整车生产方式逐渐由大规模生产转变为多品种小批量生产,混流装配生产线在汽车行业得到广泛应用。混流装配生产线上,产品种类繁多,不合理的投产序列会造成生产成本的增加以及生产效率的降低,因此,企业需要更加精准的生产计划
随着保险行业快速和规范化的发展,使得同业间激烈竞争的形成,这种竞争归根结底是人才的竞争,只有加强人力资源管理工作,才能留住人才和发挥人才作用,使企业立于不败之地。而绩效考核是企业人力资源管理的重要内容,合理利用好绩效考核,可以激发员工工作积极性,使其为企业创造更大化的价值。本文从绩效考核相关理论入手,以平衡计分卡理论为基础、以河北DS保险代理公司绩效考核为研究对象,应用文献法、案例分析法以及定性和
2017年10月,财政部颁布了《政府会计制度—行政事业单位会计科目和报表》,并要求各行政事业单位于2019年1月1日起统一执行。在财政体制发生巨大变革的背景下,如何基于新制度“双功能、双基础、双报告”的会计核算体系构建政府会计信息系统是顺利实现转轨改制的关键突破点,也是当下各行政事业单位迫切关注的问题。通过研究新旧制度衔接实施过程中所面临的问题,利用信息技术手段和财务共享的优势探索问题解决方案,将
经营现金流是企业生存和发展的中流砥柱,在供给侧结构性改革的背景下,企业需要内生动力来推动自身的发展,经营现金流的重要性可见一斑,对于为了谋求发展而选择多元化经营的企业来说更是如此。本文以实施多元化战略的豆奶业龙头老大X集团为研究对象,研究其多元化战略下的经营现金流风险。主要基于风险管理理论、投资组合理论、资本结构理论、财务弹性理论等对其展开研究。对于X集团经营现金流风险的研究,从经营现金流波动性、
土壤有机质含量是土壤综合肥力的体现,是评价土壤供养能力的重要指标。目前国内外农业生产中评价土壤有机质的采样点大多比较稀疏,这需要在有限的采样点情况下利用空间估算方法实现对土壤有机质的高精度估算。因此,本文针对稀疏样本下土壤有机质的估算问题,分析土壤有机质的主要影响因素,研究环境因素作用下的土壤耕层有机质估算方法,提出一种兼顾采样点空间自相关与采样点环境因素相似的有机质估算模型,在低采样密度下提高了