背景与目的近年来,随着广谱抗生素、抗肿瘤药物、免疫抑制剂及放射治疗的长期应用,尤其是艾滋病患者的增加,使真菌感染的发病率逐年上升。与此同时,临床上抗真菌药物的大量使用,使真菌的耐药性迅速增加,成为真菌感染治疗的一大难题。β-葡聚糖广泛存在于各类真菌的细胞壁中,阐明β-葡聚糖的致病机制,从而消除炎性细胞因子的产生成为目前治疗真菌感染的新思路。本研究的目的是探讨β-葡聚糖对小鼠单核-巨噬细胞系RAW264.7的增殖作用以及对TNF-α表达的影响。旨在探讨ERK1/2信号转导通路在真菌致病过程中的可能作用,从而为真菌感染治疗新药的研究提供实验依据。方法β-葡聚糖配制成5μg/ml的溶液,4℃冰箱保存。使用时用培养液按一定比例稀释。BALB/c小鼠来源的巨噬细胞株RAW264.7在37℃、5%CO₂及饱和湿度条件下,体外培养于含10%胎牛血清的RPMI1640培养液中。随时用倒置相差显微镜观察细胞形态,期间换液、传代,取对数生长期RAW264.7细胞,胰酶消化后计数,用培养液调整至合适的细胞密度,进行MTT实验观察β-葡聚糖对RAW264.7细胞增殖的影响;采用ELISA、RT-PCR方法检测TNF-α蛋白以及mRNA的表达情况;Western blot法检测t-ERK及p-ERK蛋白的表达;测定β-葡聚糖刺激作用前后细胞内[Ca²⁺]i及cAMP浓度变化,观察β-葡聚糖对细胞内第二信使传递系统的影响。结果MTT结果显示,β-葡聚糖对细胞增殖的影响与其作用的时间和剂量有关;TNF-α分泌量与β-葡聚糖刺激终浓度以及作用时间选择性相关;Western Blot检测结果显示,在终浓度为100μg/ml的β-葡聚糖刺激作用下RAW264.7细胞内p-ERK1蛋白表达;β-葡聚糖刺激作用前后细胞内[Ca²⁺]i及cAMP浓度发生改变结论适当浓度的β-葡聚糖可以刺激RAW264.7细胞系的增殖,并且能够剂量依赖性地诱导TNF-α的表达;β-葡聚糖可以明显活化ERK1/2-MAPK信号转导途径;β-葡聚糖刺激RAW264.7细胞内第二信使传递系统[Ca²⁺]i及cAMP浓度的改变,浓度改变幅度与β-葡聚糖的刺激浓度相关。