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本课题在胡川闽博士构建的鼠抗人肝癌单克隆抗体HAb25的部分轻链缺失的单链抗体的基础上，以完整的轻链可变区基因替换原部分缺失的轻链可变区基因，重新构建了鼠抗人肝癌单链抗体(mscFv)，将其与检测标签E-tag偶连并在原核表达载体pET15b中获得高效融合表达，表达产物(mscFv-E-tag)经初步纯化后进行的活性检测结果显示，mscFv较好地保持了亲本抗体HAb25的抗原结合特异性和亲和性。在此基础上，将mscFv及其经过人源化改造的抗人肝癌单链抗体(hscFv，由军事医学科学院袁清安博士构建)分别与人肿瘤坏死因子α(TNFα)基因偶连，分别构建了PGEX 4T-1 m／hscFv-TNFα抗肝癌双功能抗体的原核融合表达载体，并实现了高效表达，表达产物经纯化后进行的活性检测结果显示，m／hscFv-TNFα均保持了亲本抗体HAb25的抗原结合特性，并对靶细胞(SMMC-7721)具有明确的选择性杀伤作用，进一步的荷肝癌(SMMC-7721)裸鼠体内抑瘤实验结果表明，m／hscFv-TNFα均具有明确的导向杀伤作用。 一、抗肝癌单链抗体的重新构建、表达及其活性检测