高糖对视网膜色素上皮屏障与转运功能的影响

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目的 RPE有多种功能,如构成视网膜外屏障、主动转运液体、分泌一系列细胞因子等。在糖尿病时上述功能均可发生变化,直接或间接参与黄斑水肿的发生,屏障功能与液体转运功能比较直接影响到黄斑水肿,因此本研究拟观察在高糖环境下RPE的通透性、紧密连接以及主动转运功能的改变,以探讨视网膜外屏障在糖尿病黄斑水肿中的作用,为探索有效的治疗方法提供理论依据。 方法 1 用ARPE-19细胞系,培养在Millicell HA滤膜上,建立视网膜外屏障模型。 2 用含不同糖浓度(7mmol/L、16mmol/L、30mmol/L)的培养基培养ARPE-19细胞,在不同时间点(1周、2周、3周、4周)测量ARPE-19的跨上皮电阻(TER)与对辣根过氧化物酶(HRP)的通透性。 3 RT-PCR检测在不同糖浓度的培养基中生长的细胞紧密连接与液体转运相关因子occludin、zo-1、N-cadherin、β-catenin、Cx43、Na-K-ATPase α1、Na-K-ATPase β1、P2Y2的基因表达情况。 4 Western blot检测occludin、β-catenin、Cx43、Na-K-ATPase β的蛋白表达情况。 结果 1 外屏障模型的建立:培养在Millicell HA滤膜上的ARPE-19细胞,
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