中药提取物对体外蛋白非酶糖化抑制作用的研究

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非酶糖化(nonenzymatic glycosylation,NEG)在糖尿病慢性并发症发病机制中的作用已经越来越引起人们的重视,对于NEG和非酶糖化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)抑制药物的研究也日益深入,也取得了一定的成就,一些对NEG具有抑制作用的化合物也相继出现。近年来,一些学者对中药(Traditional Chinese Medicine,TCM)抑制NEG的作用也进行了一些研究,但大多停留在对方剂的疗效总结和粗提物的筛选方面,深入的研究则较少。本实验通过建立体外蛋白质非酶糖化筛选模型,从20味中药中筛选对体外AGE生成具有抑制作用的中药,然后再从筛选出的有效药物中选取黄芪进行分段,将各段产物在同一筛选模型中进行检测,从而寻找其中的有效组分。首先我们进行20味药物的筛选:将各浓度中药提取物加入含500mmol/l葡萄糖与50 mg/ml牛血清白蛋白的非酶糖化反应液中,37℃条件下避光孵育1个月。测定产物的荧光度值,氯化硝基四氮唑蓝(NBT)显色反应强度,并用自制抗体对其进行酶联免疫检测(ELISA)。然后我们从筛选出有效的几味药物中,选择黄芪进行组分有效性检测:制备黄芪水提物,采用大孔吸附树脂分离法,用不同浓度的乙醇溶液进行梯度洗脱,洗脱液同上孵育1个月,测定产物的荧光度值,氯化硝基四氮唑蓝(NBT)显色反应强度,ELISA检测。最后通过体外筛选模型的筛选:8号、9号、10号、13号、14号药物对体外蛋白非酶糖化具有很好的抑制作用。在同一筛选模型中,对有效药物中的黄芪经大孔吸附树脂分离的5个组分的检测结果表明,其中的30%、50%、70%乙醇洗脱部分对体外非酶糖化有显著抑制作用。本研究结果显示:8号、9号、10号、13号、14号中药对非酶糖化所引起的糖尿病并发症可能有一定的治疗作用。黄芪的30%、50%、70%乙醇洗脱部分可能是非酶糖化抑制的有效组分,可用于治疗非酶糖化所引起的糖尿病并发症的进一步研究。
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