目的:观察外源性成熟树突状细胞（Dendritic Cells,DCs）通过P选择素/PSGL-1途径介导免疫炎症反应中的作用,进而对主动脉粥样硬化发生、发展的影响,并探讨其相关作用机制。方法:首先建立ApoE^-/-/P^-/-和ApoE^-/-/PSGL^-/-两种双基因敲除小鼠模型。将实验小鼠分成6组:（1）AS model组(ApoE^-/-小鼠+高脂饮食+NS)（2）ApoE^-/-/P^-/-组(ApoE^-/-/P^-/-小鼠+高脂饮食+NS)（3）ApoE^-/-/P^-/-+P-sel组(ApoE^-/-/P^-/-小鼠+高脂饮食+P选择素)（4）ApoE^-/-/P^-/-+DCs组(ApoE^-/-/P^-/-小鼠+高脂饮食+DCs)（5）ApoE^-/-/PSGL^-/-+DCs组(ApoE^-/-/PSGL^-/-小鼠+高脂饮食+DCs)（6）ApoE^-/-/PSGL^-/-+NS组(ApoE^-/-/PSGL^-/-小鼠+高脂饮食+NS)。采集野生型小鼠骨髓单核细胞,用免疫磁珠分选法获取得到纯化的野生型成熟DCs。所有分组小鼠第9周起始按照以下方案处理:AS model组和ApoE^-/-/P^-/-组第9周予小鼠尾静脉注射200ul NS,之后每周予小鼠大腿内侧单点皮下注射200ul NS,直至第16周;ApoE^-/-/P^-/-+P-sel组小鼠第9周予小鼠尾静脉注射1×10⁶ P选择素,之后每周予小鼠大腿内侧单点皮下注射200ulNS,直至第16周;ApoE^-/-/P^-/-+DCs第9周予小鼠尾静脉注射1×10⁶野生型外源性成熟DCs,之后每周予小鼠大腿内侧单点皮下注射1×10⁶野生型外源性成熟DCs,直至第16周;ApoE^-/-/PSGL^-/-+DCs组第9周予小鼠尾静脉注射1×10⁶野生型外源性成熟DCs,之后每周予小鼠大腿内侧单点皮下注射1×10⁶野生型外源性成熟DCs,直至第16周;ApoE^-/-/PSGL^-/-+NS组第9周予小鼠尾静脉注射200ul NS,之后每周予小鼠大腿内侧单点皮下注射200ulNS,直至第16周。之后所有分组小鼠断颈处死,并取相应标本进行相关检测。通过流式细胞仪（Flow cytometry,FCM）测定小鼠外周血成熟DCs的相关表型的表达情况,包括CD40、CD80、CD83、CD86和MHCⅡ;小鼠脾脏T细胞亚群中Treg标志物（CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺）占CD4⁺细胞的比例。应用酶联免疫吸附试验（Enzyme linked inmunosorbent assay,ELISA）测定小鼠外周血清IL-6、TNF-α的浓度水平;HE染色观察小鼠主动脉根部斑块的病变程度;油红染色在大体上观察小鼠主动脉粥样硬化的病变程度;Masson三色染色观察小鼠主动脉根部血管内膜纤维化的病变程度;Real-time PCR测定小鼠主动脉标本中IL-6和TNF-a mRNA的表达含量;免疫荧光测定小鼠主动脉根部粥样硬化病灶处CD11c、TLR4、MyD88、NF-kb的表达。结果:流式细胞仪测定各组小鼠外周血成熟DCs相关表型的表达情况。结果显示:整体而言,AS model组表达水平最高,ApoE^-/-/PSGL^-/-+DCs组和ApoE^-/-/P^-/-+DCs组表达水平其次,ApoE^-/-/P^-/-+P-sel组表达水平再次之,ApoE^-/-/PSGL^-/-+NS组和ApoE^-/-/P^-/-组表达水平最低;组间比较,ApoE^-/-/PSGL^-/-+DCs组相关表型表达明显高于ApoE^-/-/PSGL^-/-+NS组,（P<0.05）;ApoE^-/-/P^-/-+P-sel组相关表型表达高于ApoE^-/-/P^-/-组,（P<0.05）;ApoE^-/-/PSGL^-/-+NS组和ApoE^-/-/P^-/-组均低于AS model组,（P<0.05）;而ApoE^-/-P^-/-+P-sel组,ApoE^-/-P^-/-+DCs组和ApoE^-/-/PSGL^-/-+DCs组与AS model组比较,组间比较没有显著差异。观察小鼠脾脏中Treg占CD4⁺T细胞的比例（即CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞比例）,我们也发现,ApoE^-/-/PSGL^-/-+NS组和ApoE^-/-/P^-/-组中CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞比例最高,而ApoE^-/-/PSGL^-/-+DCs组和ApoE^-/-/P^-/-+DCs组次之,ApoE^-/-/P^-/-+P-sel组再次之,而AS model组的CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞比例最低;组间进行比较,ApoE^-/-/PSGL^-/-+DCs组CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞比例表达明显低于ApoE^-/-/PSGL^-/-+NS组,（P<0.05）;ApoE^-/-/P^-/-+P-sel组CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞比例表达明显低于ApoE^-/-/P^-/-组,（P<0.05）;ApoE^-/-/PSGL^-/-+NS组和ApoE^-/-/P^-/-组均高于AS model组,（P<0.05）;而ApoE^-/-P^-/-+P-sel组,ApoE^-/-P^-/-+DCs组和ApoE^-/-/PSGL^-/-+DCs组与AS model组比较,组间没有显著差异。对小鼠主动脉根部HE染色,我们发现,ApoE^-/-/P^-/-组和ApoE^/-/PSGL^-/-+NS组动脉粥样硬化程度最轻,ApoE^-/-/P^-/-+P-sel组次之,AS model组、ApoE^-/-/P^-/-+DCs组和ApoE^/-/PSGL^-/-+DCs组动脉粥样硬化程度最重。组间进行比较,我们发现,ApoE^-/-/P^-/-组和ApoE^-/-/P^-/-+P-sel组比较,小鼠主动脉根部AS程度显著减轻;ApoE^-/-/PSGL^-/-+NS组相较ApoE^-/-/PSGL^-/-+DCs组而言,同样可见相似的变化,其动脉粥样硬化的程度明显减轻,差异有统计学意义（p<0.05）。而ApoE^-/-/PSGL^-/-+NS组和ApoE^-/-/P^-/-组之间比较,ApoE^-/-/P^-/-组斑块病变程度更轻一些,但是两者之间比较没有显著差异。而ApoE^-/-/P^-/-+P-sel组、ApoE^-/-/P^-/-+DCs和ApoE^-/-/PSGL^-/-+DCs组与AS model组比较,主动脉根部AS严重程度大体类似;但是与AS model组相比,ApoE^-/-/P^-/-+P-sel组和ApoE^-/-/PSGL^-/-+DCs组小鼠主动脉AS病变程度、斑块面积、脂质池大小略有增加,但是无明显统计学差异;同样,ApoE^-/-/P^-/-+DCs小鼠主动脉内皮下也见部分AS斑块沉积,伴有少量坏死脂质池形成,内有少许白色针尖样胆固醇结晶,但是其病变程度、斑块面积均低于AS model组,其差异具有统计学意义（p<0.05）。Masson三色染色结果也提示,AS model组血管纤维化的程度最重,ApoE^/-/PSGL^-/-+DCs组和ApoE^-/-/P^-/-+DCs组纤维化程度较重,而ApoE^-/-/P^-/-+P-sel组纤维化程度次之,而ApoE^/-/PSGL^-/-+NS组和ApoE^-/-/P^-/-组血管纤维化的程度最轻。组间进行比较,ApoE^-/-/P^-/-组和ApoE^-/-/P^-/-+P-sel组相比较,小鼠主动脉根部纤维化水平显著减轻,有统计学意义（p<0.05）;ApoE^-/-/PSGL^-/-+NS组相较ApoE^-/-/PSGL^-/-+DCs组而言,同样可见相似的变化,其管腔内膜的纤维化程度明显减轻,差异有统计学意义（p<0.05）;而ApoE^-/-/PSGL^-/-+NS组和ApoE^-/-/P^-/-组之间比较,ApoE^-/-/PSGL^-/-+NS组斑块内膜的纤维化程度更轻一些,但是两者没有统计学差异（p>0.05）;而ApoE^-/-/P^-/-+P-sel组、ApoE^-/-/P^-/-+DCs组和ApoE^-/-/PSGL^-/-+DCs组与AS model组比较,主动脉根部纤维化严重程度基本类似（p>0.05）。大体油红染色结果显示,AS model组、ApoE^-/-/P^-/-+DCs组和ApoE^-/-/PSGL^-/-+DCs组主动脉标本油红染色程度最高,ApoE^-/-/P^-/-+P-sel组油红染色水平次之,ApoE^-/-/PSGL^-/-+NS组和ApoE^-/-/P^-/-组的管腔内膜的油红染色程度最少。组间进行比较,ApoE^-/-/P^-/-组和ApoE^-/-/P^-/-+P-sel组比较,小鼠主动脉油红染色程度显著减轻;ApoE^-/-/PSGL^-/-+NS组相较ApoE^-/-/PSGL^-/-+DCs组而言,同样可见相似的变化,其大动脉血管油红染色的程度明显减轻;与AS model组相比,ApoE^-/-/P^-/-+DCs和ApoE^-/-/PSGL^-/-+DCs组小鼠油红染色程度略有增加;与AS model组相比,ApoE^-/-/P^-/-+P-sel组小鼠大动脉油红染色程度略减低,但是都没有显著差异。用ELISA法测定各组小鼠外周血浆IL-6、TNF-α浓度水平,我们发现,各组IL-6水平如下:ApoE^-/-/PSGL^-/-+DCs组外周血浆IL-6的浓度水平最高,而AS model组、ApoE^-/-/P^-/-+DCs外周血浆IL-6的浓度水平次之,而ApoE^-/-/P^-/-+P-sel组外周血浆IL-6的浓度水平再次之,相对ApoE^-/-/P^-/-+DCs和ApoE^-/-/PSGL^-/-+DCs组有所减轻,但是没有显著性差异;而ApoE^-/-/P^-/-组和ApoE^-/-/PSGL^-/-+NS组的外周血浆IL-6的浓度水平最低。各组TNF-α水平如下:AS model组外周血浆TNF-α的浓度水平最高,而ApoE^-/-/P^-/-+DCs和ApoE^-/-/P^-/-+P-sel组外周血浆TNF-α的浓度水平次之;而ApoE^-/-/PSGL^-/-+DCs组外周血浆TNF-α的浓度水平再次之,相对ApoE^-/-/P^-/-+DCs和ApoE^-/-/P^-/-+P-sel组有所减轻,但是没有显著性差异;而ApoE^-/-/P^-/-组和ApoE^-/-/PSGL^-/-+NS组的外周血浆TNF-α的浓度水平最低。将各实验组组间进行比较,我们发现,（1）ApoE^-/-/P^-/-组和ApoE^-/-/P^-/-+P-sel组比较,小鼠外周血浆IL-6和TNF-α的浓度水平明显减少,有统计学意义（p<0.05）;（2）ApoE^-/-/PSGL^-/-+NS组相较ApoE^-/-/PSGL^-/-+DCs组而言,同样可见IL-6和TNF-α的浓度水平明显减少,差异有统计学意义（p<0.05）。（3）而ApoE^-/-/PSGL^-/-+NS组和ApoE^-/-/P^-/-组之间比较,虽然ApoE^-/-/PSGL^-/-+NS组IL-6和TNF-α的浓度水平更低一些,但是两者之间比较没有显著差异。（4）而ApoE^-/-/P^-/-+P-sel组、ApoE^-/-/P^-/-+DCs和ApoE^-/-/PSGL^-/-+DCs组与AS model组比较,IL-6和TNF-α的浓度水平大致相类似,没有统计学意义（p>0.05）;（5）但是与AS model组相比,ApoE^-/-/P^-/-组和ApoE^-/-/PSGL^-/-+NS组小鼠的IL-6和TNF-a的浓度水平明显减少,有统计学差异（p<0.05）。而用Real-time PCR测定各组小鼠主动脉内IL-6和TLR-4 mRNA分布水平,我们发现,与AS model组相比较,ApoE^-/-/PSGL^-/-+DCs组、ApoE^-/-/P^-/-+DCs和ApoE^-/-/P^-/-+P-sel组各组的IL-6表达浓度与AS model组相类似,其中ApoE^-/-/PSGL^-/-+DCs组相对更多些,而ApoE^-/-/P^-/-+DCs和ApoE^-/-/P^-/-+P-sel组相对少些,但是各组之间比较都没有统计学意义。但是ApoE^-/-/P^-/-组和ApoE^-/-/P^-/-+P-sel组相比较,IL-6的表达明显减少,有统计学差异;ApoE^-/-/PSGL^-/-+NS组与ApoE^-/-/PSGL^-/-+DCs组比较,IL-6表达也明显减少,有统计学意义。测定TNF-a mRNA表达含量,AS model组和ApoE^-/-/PSGL^-/-+DCs组的TNF-a表达浓度最高,ApoE^-/-/P^-/-+DCs和ApoE^-/-/P^-/-+P-sel组的TNF-a表达浓度相对较少,各组之间比较都没有统计学意义。但是ApoE^-/-/P^-/-组和ApoE^-/-/P^-/-+P-sel组相比较,TNF-a的表达明显减少,有统计学差异;ApoE^-/-/PSGL^-/-对照组和ApoE^-/-/PSGL^-/-+DCs组比较,TNF-a表达也明显减少,有统计学意义。免疫荧光结果表明,小鼠局部斑块部位的内膜表面TLR4、MyD88和NF-kb阳性成分含量,表达最高的是AS model组;其次是ApoE^-/-/PSGL^-/-+DCs组、ApoE^-/-/P^-/-+DCs组和ApoE^-/-/P^-/-+P-sel组;最少的是ApoE^-/-/PSGL^-/-+NS组和ApoE^-/-/P^-/-组。组间比较,我们发现,与AS model组相比,ApoE^-/-/P^-/-组和ApoE^-/-/PSGL^-/-+NS组小鼠斑块内膜表达的TLR4、MyD88和NF-kb水平明显减少,有统计学差异（p<0.05）;ApoE^-/-/P^-/-组和ApoE^-/-/P^-/-+P-sel组比较,小鼠斑块内膜表达的TLR4、MyD88和NF-kb水平明显减少,有统计学意义（p<0.05）;ApoE^-/-/PSGL^-/-+NS组相较ApoE^-/-/PSGL^-/-+DCs组而言,同样可见TLR4、MyD88和NF-kb表达水平明显减少,差异有统计学意义（p<0.05）。与AS model组比较,ApoE^-/-/P^-/-+P-sel组、ApoE^-/-/P^-/-+DCs组和ApoE^-/-/PSGL^-/-+DCs组,三组斑块内膜表达的TLR4、MyD88和NF-kb水平大致相类似,没有统计学意义（p>0.05）。结论:上述这些各组结果从成熟DCs共刺激因子的表达情况、病变局部和大体病理、血管纤维化水平、炎症因子的浓度、mRNA表达水平和免疫荧光等多种检测手段来说明,外源性成熟DCs能够通过P选择素/PSGL-1途径刺激体内未成熟DCs的成熟,通过上调未成熟DCs表面TLR-4受体的表达,激活下游TLR-4-MyD88-NF-κB信号通路,促进机体细胞免疫炎症反应的加剧,进而影响体内主动脉粥样硬化病变的发生、发展。