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目的:建立人肝癌细胞株SMMC-7721裸小鼠实验模型,探讨环磷酰胺(CTX)联合黄芩苷及黄芩苷不同剂量对人肝癌细胞株SMMC-7721裸小鼠的一般项目,免疫器官(脾脏、胸腺),瘤重,Cyclin D1和Caspase-3表达影响的实验研究,来探讨黄芩苷的抗肿瘤机制,为环磷酰胺(CTX)联合黄芩苷及黄芩苷在临床应用在抗肿瘤研究方面提供理论依据。
方法:将50只裸小鼠按随机化原则分成5组,取其中1组为荷瘤对照组,再将其余4组混合后再次按随机化原则分为5组,每组8只。即:A组:荷瘤对照组,B组:CTX15mg/kg,C组:CTX15mg/kg+黄芩苷25mg/kg,D、E、F组分别为黄芩苷25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg。参考动物移植性肿瘤模型造模方法,无菌条件下,将培养的人肝癌SMMC-7721细胞以生理盐水洗涤2次,调细胞浓度为2.5×107/ml,立即接种于小鼠背部右侧皮下,接种后13天后开始给药(d1):除CTX为ip给药外,其余均ig10ml/kg,对照组ig等量生理盐水,每3天给药1次。每日观察小鼠进食、饮水、活动情况并测体重和肿瘤体积。各组连续给药21天后称体重、处死、剥离瘤块并称重。取瘤组织、胸腺、脾脏用电子天平称重后,计算抑瘤率,免疫器官(胸腺、脾脏)指数。根据瘤块重量计算抑瘤率,绘制体重变化曲线。并采用免疫组织化学方法检测肝癌组织中CyclinD1和Caspase-3的表达水平。
结果:与荷瘤对照模型组相比,黄芩苷各组及环磷酰胺组均可下调CyclinD1的表达及上调Caspase-3的表达(P<0.01),黄芩苷各组均优于CTX组(P<0.05),并呈剂量依赖性关系。在抑瘤率方面:黄芩苷各组及环磷酰胺组抑制荷瘤小鼠瘤体的生长(P<0.01);黄芩苷各组及黄芩苷+CTX组的平均瘤重与CTX组相比较:黄芩苷中、小剂量组平均瘤重大于CTX组,并有显著性差异(P<0.05);黄芩苷大剂量组与CTX组相差不大,无显著性差异(P>0.05);黄芩苷各组抑瘤率与剂量之间呈依赖性关系;CTX+黄芩苷组平均瘤重小于CTX组,但无显著性差异(P)0.05)。在保护免疫器官功能方面,无论脾脏指数还是胸腺指数,黄芩苷各组均显著好于荷瘤对照组及CTX组(P<0.01)。
结论:黄芩苷可能是通过下调CyclinD1的表达及上调Caspase-3的表达水平的机制,进而抑制人肝癌细胞株SMMC-7721荷瘤小鼠瘤体的生长,增强荷瘤小鼠免疫器官指数,改善荷瘤小鼠的生存质量。基于上述机制黄芩苷可能成为治疗原发性肝癌的有效手段之一。