目的:建立简易的紫外分光光度法测定两面针总生物碱的含量,在此基础上研究酸水-醇提取、大孔树脂分离两面针总生物碱的工艺。方法:建立紫外分光光度法测定两面针总生物碱的含量。以总生物碱的提取率为指标,正交设计优选两面针总生物碱的提取工艺。用大孔树脂一次性分离或梯度吸附分离两面针总生物碱,优选树脂、吸附、洗脱和再生的条件。以薄层色谱法和高效液相色谱法检测分离得到的产品。结果:紫外分光光度法测定两面针总生物碱的含量:在60%乙醇-pH5.0醋酸-醋酸钠缓冲液中,328nm波长下,得回归方程Y=0.08366X+0.0131,线性范围 0.51～10.20 mg · L-1,r=0.9999,回收率 99.5%。两面针总生物碱的最佳提取工艺:用60%乙醇-0.5%盐酸回流提取两面针药材颗粒3次,溶剂量分别为6倍、5倍、4倍,回流时间分别为1.Oh、0.5h、0.5h,总生物碱提取率94.65%。大孔树脂一次性分离两面针总生物碱:将提取液回收乙醇至无醇味,静置2d,分取上清液,沉淀以0.5%盐酸水溶液分15～20次捏溶,过滤,合并滤液到上清液中作为上样液,以8BV(柱床体积)上D-101树脂柱,吸附率94.81%,吸附量29.45g · Kg-1,吸附6h后用1BV pH5盐酸水溶液洗脱杂质,5BV 70%乙醇洗脱生物碱,洗脱率98.60%,产品总碱含量25.19%,保留率92.92%。大孔树脂梯度吸附法分离两面针总生物碱:第一级:以60%乙醇-0.5%盐酸提取液作为上样液,进行2次吸附,吸附率分别为41.99%、23.25%,首次吸附量25.08 g· Kg-1,产品总生物碱含量分别为27.32%、21.91%,主要是脂溶性较强成分,氯化两面针碱含量较低。第二级:将第一级第2次吸附的流出液回收一定量乙醇,进行2次吸附,吸附率分别为59.34%、44.05%,首次吸附量15.71 g·Kg-1,产品总生物碱含量分别为25.22%、17.82%,主要是中等脂溶性成分,氯化两面针碱含量较高。第三级:将第二级第2次吸附的流出液回收乙醇至无醇味,进行1次吸附,吸附率94.86%,吸附量14.56 g· Kg-1,产品总生物碱含量18.10%,主要是水溶性较强成分,氯化两面针碱含量最高。分离全程总生物碱保留率 98.07%。结论:紫外分光光度法测定两面针总生物碱的含量简便、快速、准确;优选出的提取工艺大大提高了总生物碱的提取率;用大孔树脂一次性富集总生物碱,选用的树脂廉价而高效,提高了保留率,但捏溶沉淀麻烦;用大孔树脂梯度吸附法富集总生物碱,免去捏溶沉淀的麻烦,还把分离成分按极性大小初步分离开来。整个工艺安全、环保而高效,达到了初步分离两面针总生物碱的目的。创新点:含量测定样品预处理简易,不需染料络合、氯仿萃取,提高了工作效率;提取溶剂加酸,大大提高了总生物碱提取率;首次梯度吸附法分离有效成分。