香蕉枯萎病菌致病因子的纯化鉴定及基因克隆

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香蕉枯萎病是一种危害严重的维管束病害,该文研究了其病原菌Fusarium oxysporum f.sp.cubense的致病机制.从病菌的4号生理小种中筛选、纯化、鉴定病菌分泌的致病性多聚半乳糖醛酸酶,测定其生物学特性.根据纯化的酶蛋白N-末端氨基酸序列,克隆了蛋白质编码基因,对其序列进行同源性比较和分析蛋白质结构与功能的关系.首次研究香蕉枯萎病菌产生的细胞壁降解酶和毒素.通过果胶酶同工酶电泳发现,与其它非侵染香蕉的尖孢镰刀菌致病型相比,病菌4号小种可在寄主体内,或在柑桔果胶诱导的条件下产生一种特异的多聚半乳糖醛酸酶同工酶,将该酶定名为PGC1.根据PGC1的N末端氨基酸序列设计简并引物,利用RT-PCR和RACE技术,克隆到PGC1 cDNA的全长序列为1215个核苷酸组成,5端包含N-端全部已测出的22个氨基酸序列和1个起始密码子(AUG),起始密码子前有50个核苷酸的5,端非编码区.3端有一个终止密码子TGA,在终止密码子下游还包含一个长67bp的3非编码区,包括加尾信号-ATAA-,以及一个含72个腺苷酸的poly(A).利用基因组步查技术克隆了PGC1基因组基因.序列分析结果表明,该基因包含了cDNA基因的全部开放阅读框,在5端除具50个核苷酸外,还包括含有TATA盒、CAAT盒和GC盒的上游序列,3端的非编码区与PGC1 cDNA序列完全一致,存在一个加poly(A)信号.pgcl基因含有4个内含子,具有真菌PGs典型的特征.
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