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目的:胃癌的发生发展是一个多基因、多阶段变异积累的复杂过程,涉及到多种基因的遗传学和表遗传学变异。基因启动子区CpG 岛的甲基化改变一种重要的表遗传学变异形式,是继基因结构变异外的另外一种主要基因失活机制。肿瘤抑制基因p16 在胃癌组织中具有很高的甲基化失活频率,该基因的异常甲基化在胃癌进展中可能扮演的重要角色是课题研究的出发点。目前常用的CpG 岛甲基化检测手段主要是定性分析技术,其测定结果只能告诉我们分析样品中是否存在目的CpG 岛甲基化,不能告诉我们其中多少目的CpG 岛存在甲基化。本研究的目的是利用变性高效液相色谱(Denature High-Performance Liquid Chromatography,DHPLC)分析技术,对p16 甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)定性测定阳性的胃癌组织进行定量测定,试图在定量分析的水平来研究p16 甲基化异常与胃癌临床病理学特征的关系。方法:用MSP 法筛选出人原发性胃癌组织中p16 甲基化阳性样品;使用能够同时扩增甲基化和非甲基化模板的通用引物扩增MSP 检测甲基化阳性样品的p16 CpG 岛;建立DHPLC 定量测定甲基化p16 的方法,测定待测胃癌样品甲基化p16 的含量,分析其与胃癌临床病理学特征的相关性。结果:在DHPLC 定量分析中,甲基化p16 色谱峰的保留时间位于5.3～6.0min 之间,而非甲基化p16 色谱峰的保留时间位于4.0～5.2min,同一CpG岛甲基化状态不同的2 种PCR 扩增产物被完全分离,对应甲基化色谱峰的面积与甲基化p16CpG 岛含量成正比。MSP 定性分析56 例胃癌样品,19 例为p16 甲基化阳性(19/56,33.9%)。用建立的DHPLC 定量测定甲基化的方法分析p16 甲基化百分含量,该19 例p16 甲基化阳性的胃癌组织,仅5 例DHPLC定量分析能够检出明显的甲基化p16 色谱峰(5/19,26.3%),这5 例胃癌组织样品中p16 甲基化细胞都在20%以上;其余14 例MSP 定性分析甲基化阳