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真菌在土壤的生态环境中具有十分重要的作用,例如降解植物残体、抑制病原菌等等。真菌群落的多样性和丰富性甚至可以作为评价植物根围土壤微生态健康与否的重要指标。微生物农药具有十分广阔的应用前景,但是关于微生物农药对土壤微生物群落的研究比较少,尤其是真菌群落。本研究采用传统生物学方法和现代分子生物学相结合的方法研究了生防荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens 2P24和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis BS908对黄瓜根围土壤中真菌微生态的影响,为田间引入生防微生物的生态安全性评估提供关键技术支撑和重要信息。用含有绿色荧光蛋白的质粒pSMC21 (gfp, Ap+, Kn+)标记荧光假单胞菌2P24,使其具有氨苄、卡那霉素抗性。经检测后发现,质粒标记对2P24的生长情况的影响不显著,因此可以用来进行田间试验并回收检测。在黄瓜苗期将BS908和含氨苄、卡那霉素抗性的2P24发酵液稀释后施入黄瓜根围土壤,之后每周用传统培养方法检测黄瓜根围土壤中真菌的数量,并用含氨苄、卡那霉素的KB培养基回收检测黄瓜根围土壤中2P24的数量。发现2P24施用后在黄瓜根围的数量一个月内由最初的3×108CFU/g干土降低到106CFU/g干土,之后一直稳定在105CFU/g干土左右。采用传统培养方法定期回收检测黄瓜根围土壤中真菌的数量发现,在2P24施用初期,黄瓜根围土壤中真菌的数量明显增多,这可能与2P24的促生长作用相关。3周之后这种影响逐渐减弱,处理和对照之间的真菌数量大致平衡。BS908施入后,对黄瓜根根围土壤真菌数量产生一定的抑制作用,影响时间在2周左右。提取黄瓜根围土壤DNA,利用真菌通用扩增引物ITS1F和ITS4对土壤DNA进行扩增,获得的PCR产物纯化后用限制性酶HinfⅠ和TaqⅠ进行酶切,然后进行T-RFLP万法检测,发现土壤中真菌群落在施用2P24后的一个月内受2P24的影响显著,一个月后2P24的影响逐渐变得不明显。枯草芽孢杆菌BS908对黄瓜根围土壤真菌群落的影响类似于2P24。利用真菌通用扩增引物NS1和带夹子的GCfung对土壤DNA进行PCR扩增,产物纯化后进行变性梯度凝胶电泳(DGGE),结果发现2P24处理后的黄瓜根围土壤真菌群落多样性明显减少,随着时间推移,2P24数量的减少,黄瓜根围土壤真菌群落渐渐恢复,施用28天后,处理和对照之间的差异逐渐消失。聚类分析结果显示,枯草芽孢杆菌对土壤真菌群落的影响时间在35天左右。总体来看,通过传统培养方法和分子生物学方法T-RFLP、DGGE的检测后发现,生防荧光假单胞菌2P24和枯草芽孢杆菌BS908施用到黄瓜根围土壤后,其本身数量随着时间的延长逐渐减少。施用初期对黄瓜根围土壤真菌群落造成的冲击较大,但是在2P24的数量降低到106CFU/g之后,其对土壤真菌群落的影响逐渐减弱,处理和对照之间的差异变得越来越小。这说明生防菌对黄瓜根围土壤真菌群落的影响是有限的,时间在1个月左右。同时,也反映了生防菌随土壤病原真菌的有效防御时间也可能只有一个月的时间。