三聚氰胺(Melamine)属于一种常用的有机化工中间原料,三聚氰酸(Cyanuric acid)是其同系物。目前,国内外对三聚氰胺及其与三聚氰酸混合物的研究主要侧重于其含量检测,以及循环、泌尿、生殖等系统的影响,对免疫系统的影响研究较少。本研究旨在明确三聚氰胺及其与三聚氰酸联合对小鼠过敏反应的影响及小鼠脂多糖(LPS)信号通路的影响,以期为完善三聚氰胺及其同系物的食品安全性毒理学评价体系提供可靠的依据。实验一 三聚氰胺及其与三聚氰酸混合对卵清蛋白致敏效应的影响研究方法：将64只体重22-24g的KM系SPF级雄性小鼠随机分为阴性对照组、阳性对照组、三聚氰胺低、中、高(2mg·kg-1、8mg·kg-1、32mg·kg-1)剂量组和其与三聚氰酸混合低、中、高(1+1 mg·kg-1、4+4mg·kg-1、16+16 mg·kg-1)剂量组8个试验组。在0d、14d腹腔注射卵清蛋白100 ug/只(阴性对照组除外),于28灌胃卵清蛋白50mg/只激发致敏,随后分离血清,检测卵清蛋白特异性IgE、组胺、类胰蛋白酶、IL-4、IFN-γ的含量。结果表明：①三聚氰胺及其与三聚氰酸混合对小鼠卵清蛋白致敏效应均有影响.当三聚氰胺浓度为2mg·kg-1·d-1时可促进卵清蛋白诱发的过敏反应,而当其浓度达到32mg·kg-1·d-1)时则抑制卵清蛋白诱发的过敏反应;当有三聚氰酸同时存在时,二者联合攻毒剂量超过4mg·kg-1·d-1时即可出现抑制作用。②从小鼠肺脏H.E染色切片可以看出,各组小鼠肺泡壁均呈网状结构,试验组有大量炎性渗出,肺泡壁增厚,高剂量组小鼠肺泡有一定的损伤。③三聚氰胺及其与三聚氰酸联合对小鼠血清中IFN-γ含量几乎无影响,但可显著p<0.05)或极显著p<0.01)降低小鼠血清中炎性抑制因子IL-4的含量来加剧小鼠的过敏症状。通过IFN-γ/IL-4可推测出三聚氰胺与三聚氰酸联合攻毒浓度超过16mg·kg-1·d-1时可能诱发小鼠免疫失衡。④低剂量的三聚氰胺及其与三聚氰酸联合会导致HIS、TPS含量显著(p＜0.05)或极显著(p<0.01)升高,这说明低剂量的该类物质可促进机体肥大细胞释放HIS和类胰蛋白酶,进而加剧过敏反应；当攻毒剂量达到三聚氰胺单独32mg·kg-1·d-1、三聚氰胺与三聚氰酸联合16mg·kg-1·d-1时,HIS、TPS含量极显著(p<0.01)降低,从而抑制卵清蛋白的致敏效应。说明三聚氰胺及其与三聚氰酸联合低剂量可促进,高剂量可抑制卵清蛋白致敏效应。试验二三聚氰胺及其与三聚氰酸联合对卵清蛋白致敏效应影响机制研究方法：分组处理同试验一。通过甲苯胺蓝染色检测肥大细胞数目及脱颗粒水平,流式细胞仪检测Th1、Th2细胞数以及CD40、CD40L表达量,Western blot及实时荧光定量PCR检测FcεRⅠ受体表达水平,ELISA检测IL-10、1L-16、MCP-1含量。结果表明：①三聚氰胺及其与三聚氰酸混合可以提高Thl和Th2细胞数量,导致小鼠发生免疫失衡(p<0.05),主要由于抑制炎性反应的Th2细胞数量相对较低有关,进而表现出对卵清蛋白致敏效应的促进作用。②低剂量的三聚氰胺及其与三聚氰酸联合可提高肥大细胞及嗜碱性粒细胞表面的FcεRⅠ受体表达及IgE的含量,从而加剧卵清蛋白的致敏效应。③三氰胺及其与三聚氰酸联合均可以降低脾脏CD40与CD40L的表达量,影响B细胞的活化以及IgM向IgE的转化,从而降低卵清蛋白特异性IgE的合成。④三聚氰胺及其与三聚氰酸联合可以促进肺脏肥大细胞的脱颗粒水平来影响卵清蛋白对小鼠当的致敏效应,而且16mg·kg-1·d-1三聚氰胺与三聚氰酸联合进入机体甚至还可降低肺脏肥大细胞数目,降低肥大细胞活化的细胞因子IL-16及嗜碱性粒细胞活化的因子MCP-1含量,从而降低HIS、TPS释放量,进而表现出对卵清蛋白致敏效应的抑制作用。试验三三聚氰胺及其与三聚氰酸联合对雄性小鼠LPS-TLR4信号通路的影响研究方法：攻毒处理同试验一,28天后小鼠腹腔注射LPS5mg·kg-1。检测外周血mCDl4和sCD14含量,脾脏TLR4、MyD88、NF-κb相对表达量以及血清IL-1、IL-6含量。结果表明：①三聚氰胺及其与三聚氰酸联合可极显著降低小鼠外周血sCD14的含量(p＜0.01),可通过升高mCD14含量(p<0.01)来影响LPS-TLR4信号通路信号的初步呈递。②三聚氰胺及其与三聚氰酸联合可显著小鼠脾脏TLR4的表达量(p<0.01)和MyD88的表达量(p<0.05)上调,继而影响LPS-TLR4信号通路信号有膜外向膜内转导的过程。③该类物质进入体内可下调小鼠脾脏NF-κbmRNA的表达影响LPS-TLR4信号通路的生物学效应(p<0.05),进而降低小鼠血清中IL-1、IL-6含量(p<0.01)影响B细胞的成熟与分化。