【摘 要】
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目的:评价重组抗原蛋白14-3-3的免疫原性和其在多房棘球绦虫原头节继发性感染BALB/c小鼠模型中的预防/治疗效果,并筛选出多房棘球蚴抗原蛋白14-3-3的T、B细胞优势抗原表位。方法:1.构建多房棘球绦虫重组抗原蛋白14-3-3的原核表达系统,经IPTG诱导和Ni2+亲和层析法得到高纯度的14-3-3重组蛋白后免疫BALB/c小鼠;ELISA法检测免疫后小鼠血清中的抗体和细胞因子水平变化以评估
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目的:评价重组抗原蛋白14-3-3的免疫原性和其在多房棘球绦虫原头节继发性感染BALB/c小鼠模型中的预防/治疗效果,并筛选出多房棘球蚴抗原蛋白14-3-3的T、B细胞优势抗原表位。方法:1.构建多房棘球绦虫重组抗原蛋白14-3-3的原核表达系统,经IPTG诱导和Ni2+亲和层析法得到高纯度的14-3-3重组蛋白后免疫BALB/c小鼠;ELISA法检测免疫后小鼠血清中的抗体和细胞因子水平变化以评估其免疫原性;结合泡球蚴小鼠继发性感染模型并观察囊泡数量和重量变化以评估其预防与治疗效果。2.多房棘球蚴抗原蛋白14-3-3的氨基酸序列信息通过SOPMA进行分析,并通过SWISS-MODEL对其进行同源模型的建立;通过IEDB、SYFPEITHI预测14-3-3潜在的优势T细胞抗原表位;根据Bcepred、ABCpred综合预测、分析出优势B细胞抗原表位;并与人源、犬源、鼠源的氨基酸序列比对以排除共同抗原表位,进一步通过脾淋巴细胞增殖、ELISA、ELISpot、流式细胞术等方法对生物信息学预测表位进行鉴定筛选。结果:成功表达并获取高纯度的多房棘球绦虫重组14-3-3抗原蛋白,免疫原性研究发现重组抗原蛋白14-3-3具有较好的免疫原性并可激活小鼠产生Th1/Th2混合型免疫应答;在预防效果评价模型中,经14-3-3抗原免疫后小鼠囊泡数量减少（59.84±15.09%,P=0.049）,囊泡重量减轻（83.28±18.01%,P=0.000）;在治疗效果评价模型中,经14-3-3抗原免疫后小鼠囊泡重量减轻（72.28±11.47%,P=0.006）。根据各预测软件的结果并排除人、鼠、犬共同抗原表位后,筛选出了8个潜在的抗原表位:14-3-31-15、14-3-36-21、14-3-371-86、14-3-3144-157、14-3-3145-166、14-3-3146-160、14-3-3153-161、14-3-3164-177;成功构建了14-3-3抗原蛋白的3D结构模型,并对潜在的表位位置分布进行了定位;最终鉴定出的B细胞优势抗原表位为:14-3-3145-166、14-3-3164-177;Th1优势抗原表位为:14-3-36-21、14-3-3145-166;Th2优势抗原表位为:14-3-3145-166。结论:多房棘球绦虫重组抗原蛋白14-3-3对继发性小鼠泡球蚴病具有预防与治疗作用并进一步鉴定出了2个B细胞优势抗原表位、2个Th1优势抗原表位、1个Th2优势抗原表位,本研究为后续研制高效、安全的多房棘球蚴表位疫苗提供了理论依据与实验基础。
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