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猪伪狂犬病(Pseudorabies,Pr),也称奥耶斯基病(Aujeszky’s disease,AD)可引起母猪出现繁殖障碍,成年猪出现呼吸困难,仔猪出现神经症状和腹泻症状,导致仔猪的高死亡率,给养猪业带来巨大的经济损失。目前,主要通过接种弱毒和灭活疫苗来控制此病。然而,近些年已有报道称传统的疫苗存在着免疫效果差、保护力低等问题。因此,临床上需要一种有效的方法来提高疫苗的免疫效果。中药提取物人参茎叶皂苷(GSLS)和白术多糖(RAMPs)已被证实可通过调节动物的细胞免疫和体液免疫增强疫苗的免疫效果。本研究将硒(Se)联合GSLS或RAMPs,观察其是否对伪狂犬疫苗具有佐剂作用,具体结果如下:1.RAMP-Se对伪狂犬病弱毒疫苗诱导的抗体水平的影响将不同剂量的亚硒酸钠(Se浓度分别为0.5 μg、1 μg和2 μg/0.2 ml)单独或者联合RAMPs(300 μg/0.2 ml)以溶液的形式添加到伪狂犬弱毒(aPrV)疫苗中,免疫ICR小鼠(1000 TCID50/0.2 ml),免疫后二周检测小鼠血清中特异性PrV gB抗体水平。结果显示,Se和RAMPs联合使用与Se单独使用比较,动物产生的gB抗体水平无显著差异,表明在促进aPrV疫苗诱导动物产生的特异性抗体方面,Se和RAMPs无协同作用。2 GSLS and Se对aPrV疫苗诱导的抗体水平的影响实验组小鼠免疫前连续4天经胃灌服GSLS(0.5 mg/d),对照组灌服生理盐水。随后给小鼠免疫使用含不同剂量Se(0、1、2、3和4 μg/0.2 ml)的生理盐水溶解的aPrV疫苗。结果显示,免疫前给小鼠灌服GSLS比单独使用Se或GSLS组的特异性抗体水平要高,说明Se注射和GSLS 口服对aPrV疫苗具有协同佐剂作用,其中以Se剂量为3μg时,小鼠产生的抗体水平最高。小鼠连续4天灌服GSLS(0.5 mg/d)后,使用含Se(剂量)的生理盐水稀释aPrV疫苗后,免疫小鼠,通过检测小鼠血清中gB抗体和其亚类水平,评价GSLS and Se对对aPrV诱导的体液免疫的影响。结果显示,GSLS and Se能够显著提高动物血清中IgG,IgGI和IgG2a的水平。3 GSLS and Se对aPrV疫苗诱导的细胞免疫的影响小鼠连续4天灌服GSLS(0.5 mg/d)后,使用含Se(3 μg/0.2 ml)的生理盐水稀释aPrV疫苗后,免疫小鼠,免疫后24 h,通过检测小鼠NK细胞活性和血清中IFN-γ水平,观察GSLS and Se对早期免疫的影响。小鼠免疫后二周,分离脾脏,检测淋巴细胞增殖和细胞因子分泌水平。结果显示,与疫苗对照组相比,GSLS and Se不仅能够显著提高NK细胞杀伤活性和IFN-y分泌水平,而且能够增强淋巴细胞增殖和细胞因子分泌(IL-5,IL-10,IFN-y和IL-12)水平。4 GSLS and Se提高攻毒后免疫小鼠的存活率将ICR小鼠分为aPrV疫苗组、GSLS and Se-aPrV疫苗组和空白对照组,免疫后二周,给小鼠注射野毒(fPrV,5×105 TCID50)攻毒后,连续10 d观察并记录小鼠存活率。结果显示,空白组小鼠攻毒后表现出神经症状,并在4 d内全部死亡,而GSLS and Se-aPrV疫苗组小鼠的存活率为60%,高于aPrV疫苗组的30%。5 GSLS and Se对PrV灭活疫苗诱导的体液免疫的影响将小鼠连续4 d灌服GSLS(0.5 mg/d)后,免疫含Se(3 μg/O.lmml)的PrV灭活疫苗,小鼠免疫两次,间隔二周。分别于加强免疫后2、3和4周采血,检测血清中特异性PrVgB抗体及其亚类水平。结果显示,GSLS and Se能够显著提高动物血清中gB抗体水平,其中加强免疫后3周的抗体水平最高。同时,GSLS and Se能够显著提高血清中IgG1和IgG2a水平。6 GSLS and Se对PrV灭活疫苗诱导的细胞免疫的影响小鼠连续4 d灌服GSLS(0.5 mg/d)后,免疫含Se(3μg/0.1ml)的PrV灭活疫苗,小鼠免疫两次,间隔二周。加强免疫后四周,分离小鼠脾脏,检测脾淋巴细胞增殖活性和细胞因子分泌水平。与疫苗对照组相比,GSLS and Se能够显著提高免疫小鼠脾淋巴细胞增殖活性和细胞因子(IFN-γ,IL-2和IL-6)的分泌水平。