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目的：癫痫，一种古老的常见疾病，是由脑部神经元的高度同步化异常放电所致的慢性脑部疾病。临床治疗中对于无明确病因或虽有病因却不能根治者仍主要考虑抗癫痫药物（Antiepileptic drugs,AEDs）治疗。在众多AEDs中，苯妥英钠（Phenytoin Sodium, PHT）由于其半衰期长、无镇静副作用、价格低廉等原因仍作为多种癫痫类型治疗首选药物之一。但由于其治疗谱狭窄[1]（约10-20ug/ml）且个体差异性大，故在临床治疗中极易出现多个系统的毒副作用。在神经系统不良反应中主要表现在小脑前庭功能障碍、周围神经系统损害、锥体外系功能障碍、PHT脑病、高颅压、意识障碍、植物神经功能紊乱等多个方面[2]。同时藏药七十味珍珠丸（Rannasangpei，RNSP）由于其具有镇静抗惊厥，促进神经元修复保护，降低脑损伤后NA、β-EP、5-HT神经递质产生等作用[3]故临床上常用于与AEDs协同治疗癫痫。而本实验旨在通过研究PHT、RNSP与大鼠顶叶、海马神经元凋亡的相关性来进一步了解PHT的神经毒副作用及RNSP对PHT作用后的神经元是否产生影响。具体是通过原位末端转移酶标记技术（terminal deoxynucleotidyl transferse-mediated biotinylated deoxyuridinetriphosphate nickel end labeling，TUNEL）来检测各组顶叶、海马神经元的凋亡及用免疫组化检测各组Bcl-2、Bax蛋白的表达水平。方法：1分组及给药：取健康雄性10周龄左右SD(Sprague-Dawley)大鼠40只，实验大鼠级别为清洁级，重量约200±20g，根据给药不同随机分为NS（生理盐水）组、RNSP组、PHT组及PHT+RNSP混合组4组，每组10只大鼠：再根据时间因素10天、20天分为2个亚组，每个亚组5只大鼠。给药剂量为成人单位体重常规治疗量25倍，具体为NS1ml/100g/d，PHT150mg/kg/d，RNSP250mg/kg/d；方式为一天两次灌胃器灌胃，分别灌胃10天、20天。2取材及检测：取各组大鼠予以水合氯醛腹腔麻醉后，剪开胸腔暴露心脏，灌注针由心尖入针经左心室至主动脉，NS冲洗多聚甲醛灌注后取脑组织顶叶、海马置于多聚甲醛中浸泡固定，24小时后取标本脱水透明包埋切片。通过TUNEL检测各组凋亡神经元凋亡情况并以细胞凋亡率表示各组结果；通过免疫组化检测各组神经元Bcl-2、Bax蛋白阳性细胞表达情况并以AO值表示各组结果。3统计分析：通过SPSS13.0统计软件进行数据分析，本实验为完全随机设计资料的多个样本均数比较可使用方差分析，组间均数比较可使用Dunnett-t检验或SNK-q检验，Bcl-2蛋白与Bax蛋白间相关性检测可用直线相关分析方法。结果：1各实验组中大鼠顶叶神经元的凋亡情况：1.1HE染色：各药物组大鼠顶叶皮质神经元排列较整齐，仅可见少数凋亡细胞，呈胞膜皱缩、胞核固缩深染、染色质边集及周围空泡形成。与NS组比较形态上无明显差异。1.2TUNEL结果：NS组可见少数凋亡细胞，胞核固缩其内出现褐色颗粒或团块；RNSP组、PHT组、PHT+RNSP混合组可见散在分布凋亡细胞，将组间均数进行两两比较P值>0.01，表示各组间差异无统计学意义。1.3Bcl-2及Bax蛋白表达：Bcl-2蛋白为抗凋亡蛋白，阳性细胞表达为胞浆核膜出现棕黄色颗粒，呈重染；Bax蛋白为促凋亡蛋白，阳性细胞表达为胞浆呈黄褐色。通过统计标本阳性细胞的平均光密度值即AO值进行组间两两比较P值>0.01，表示各组间差异无统计学意义。2各实验组中大鼠海马神经元的凋亡情况：2.1HE染色：NS组大鼠海马神经元排列整齐，细胞轮廓清晰，胞浆红染胞核蓝染，可见少数凋亡细胞，呈胞膜皱缩、胞核固缩深染、染色质边集及周围空泡形成。RNSP组仅可见散在分布的几个凋亡细胞。PHT组凋亡细胞较多，呈神经元排列凌乱、胞间距增大、细胞轮廓模糊、胞核固缩深染及周围空泡形成，其长疗程亚组凋亡尤为明显。PHT+RNSP组凋亡情况介于PHT组、RNSP组之间。2.2TUNEL结果：NS组可见少数凋亡细胞，RNSP组可见散在分布凋亡细胞，将两组均数进行比较P值>0.01，表示两组间差异无统计学意义。PHT组凋亡细胞明显增多，以长疗程PHT组为著；PHT+RNSP混合组凋亡情况一般，与NS组一起进行多样本均数两两比较均为P<0.01，表示各组间存在明显差异。2.3Bcl-2及Bax蛋白表达：在Bax蛋白表达中，NS组、RNSP组可见少数表达阳性细胞；PHT+RNSP组表达阳性细胞增多；PHT组表达阳性细胞最多及着色最强，长疗程亚组尤为显著。在Bcl-2蛋白表达中，各组情况与前述恰好相反。统计各组间阳性细胞AO值并进行两两比较，NS组与RNSP组间差异无统计学意义，余各组间均存在明显差异。3Bcl-2蛋白与Bax蛋白相关性：在实验组大鼠海马神经元中Bcl-2蛋白与Bax蛋白表达呈负相关。结论：1PHT、RNSP及PHT+RNSP组在长短疗程因素参与下对正常大鼠顶叶皮质区神经元凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达未产生明显影响。2RNSP组中长短疗程亚组对海马神经元凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达均未产生影响：PHT组可明显引起海马神经元凋亡，Bcl-2蛋白表达减少，Bax蛋白表达增多，在长疗程亚组中影响显著；PHT+RNSP混合组中海马神经元凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达情况均介于RNSP组与PHT组之间，表示RNSP可能对PHT作用后的海马神经元凋亡有抑制作用。3在实验组中Bcl-2蛋白与Bax蛋白的表达呈负相关，表明Bcl-2、Bax蛋白有可能参与了神经元凋亡路径的调控。