论文部分内容阅读
目的:观察五味子乙素(Schisandrin B,Sch B)对慢性酒精中毒大鼠学习记忆障碍的影响,探讨五味子乙素改善慢性酒精中毒大鼠学习记忆障碍的可能作用机制,为慢性酒精中毒导致学习记忆障碍的防治提供理论和实验依据。方法:(1)65只成年清洁级Wistar雄性大鼠,随机选取13只每天灌胃蒸馏水,作为空白对照组。另外52只大鼠每日以56°北京红星二锅头白酒灌胃,连续8w,建立慢性酒精中毒动物模型,于酒精戒断24h后,对动物进行评分,判定慢性酒精中毒模型复制是否成功;将动物模型建立成功的52只大鼠随机分为酒精中毒模型组、Sch B低剂量组、Sch B中剂量组、Sch B高剂量组,每组均13只;酒精中毒模型组每天只给白酒灌胃,Sch B低剂量组、Sch B中剂量组、Sch B高剂量组每天白酒灌胃30 min后,分别按10mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg给予Sch B灌胃,1天1次,连续30天。(2)采用Morris水迷宫检测各组大鼠的学习记忆能力。(3)应用HE染色观察各组大鼠海马CA1区神经元形态改变。(4)应用透射电镜观察各组大鼠海马CA1区神经元的超微结构及测定突触结构的形态参数。(5)应用免疫组化检测各组大鼠海马CA1区突触后致密蛋白95(Postsynaptic density protein-95,PSD-95)、突触素(Synaptophysin,SYN)的表达。(6)应用Western Blot检测各组大鼠海马组织中的PSD-95、SYN蛋白的表达。结果:(1)Morris水迷宫实验结果显示,与空白对照组相比,酒精中毒模型组空间探索实验潜伏期明显变长,而平台穿越次数减少(P<0.05);与酒精中毒模型组比,Sch B低剂量组、Sch B中剂量组、Sch B高剂量组空间探索实验潜伏期均缩短,而平台穿越次数增多,以Sch B高剂量组变化明显(P<0.05)。(2)HE染色结果显示:与空白对照组相比,酒精中毒模型组海马组织结构异常,海马区神经元排列紊乱,大量神经元胞核异形,染色质深染,病变严重;与酒精中毒模型组相比,Sch B低剂量组、Sch B中剂量组、Sch B高剂量组海马组织结构异常较轻,细胞排列无明显紊乱,病变减轻,以Sch B中剂量组、Sch B高剂量组变化明显。(3)透射电镜观察到酒精中毒模型组大鼠海马组织神经细胞水肿,细胞核肿胀,细胞器减少,线粒体明显肿胀,突触小体肿胀严重,间隙变宽,突触后膜致密物质不均,突触数量明显减少;通过Sch B干预后,神经细胞胞质丰富,细胞器增多,细胞损伤程度降低,突触小体水肿程度较低,突触间隙清晰,突触后致密区增厚,突触界面较长,突触数量增加。(4)免疫组化结果显示,与空白对照组比较,酒精中毒模型组PSD-95、SYN表达显著减少(P<0.05);与酒精中毒模型组比较,Sch B低剂量组、Sch B中剂量组、Sch B高剂量组PSD-95、SYN表达均增多,Sch B高剂量组增多明显(P<0.05)。(5)Western Blot实验结果显示,与空白对照组比较,酒精中毒模型组PSD-95、SYN蛋白表达降低(P<0.05);与酒精中毒模型组相比,Sch B低剂量组、Sch B中剂量组、Sch B高剂量组海马组织中的PSD-95、SYN蛋白表达均升高,Sch B高剂量组中表达水平升高明显(P<0.05)。结论:慢性酒精中毒可引起大鼠学习记忆能力障碍,其可能与海马组织中PSD-95和SYN蛋白表达下降、突触数量减少、突触间隙变宽、突触后膜致密物质变薄有关;五味子乙素可能通过上调大鼠海马组织中的PSD-95、SYN蛋白表达,影响突触结构与传递效能,促进神经细胞突触可塑性,进而改善学习和记忆,这可能是五味子乙素改善慢性酒精中毒大鼠学习记忆能力障碍的分子机制。