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背景邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[di(2-ethylhexy1)phthalate,DEHP]为代表的邻苯二甲酸酯类塑化剂是公认的环境内分泌干扰物(environmental endocrine disrupting chemicals,EEDs)。可透过人体血-睾屏障、血-脑屏障,破坏人体的生殖系统及神经系统。DEHP经人体吸收,可快速水解为邻苯二甲酸单乙基乙酯[mono(2-ethylhexyl)phthalate,MEHP],在人体长期蓄积,产生生殖毒性和雌激素效应。5-氨基荧光素(5-Aminofluorescein,5-AF)是一小分子化学物质,是氨基类荧光素。其活性氨基基团能与生物分子中的羧基结合,结合后荧光强度大大增强,因而广泛应用于蛋白质分析和免疫学研究。目的合成具有荧光示踪的MEHP,旨在用于细胞及分子水平的毒性机理研究。方法1.MEHP与5-氨基荧光素(5-AF)经酰胺脱水缩合反应制备MEHP衍生物荧光探针(MEHP-AF)。2.MEHP-AF纯化后经液相色谱-质谱(HPLC-MS)、傅里叶变换红外光谱等进行纯度、结构鉴定,以荧光稳态和荧光瞬态进行探针的荧光特性分析。3.实验以Hela细胞为对象,比较5-AF与MEHP-AF的性能差异;以时间为变量研究MEHP-AF的入胞特征;以藻红蛋白标记的雌激素受体(estrogen receptor,ER)抗体定位Hela细胞探讨MEHP-AF与ER的相互作用。结果1.MEHP-AF为结构全新的化合物。分子式为C36H33N08,分子量为607.65。2.理化特征表明,MEHP-AF为红褐色油状物。与MEHP化学性质相似,不溶于水,而溶解氯仿、乙醇等有机溶剂。经纯化后的MEHP-AF的纯度含量达92.4%。3.5-AF与MEHP-AF的性能差异结果表明,水溶性的5-AF在浓度高达100 μM难以进入细胞内,而MEHP-AF在浓度低至1 μM即可分布至细胞质与细胞核。在15 min可见MEHP--AF透过细胞膜进入胞质,少量达到细胞核;随着作用时间增加进入到细胞核的量也明显增加。ER为核受体,也可分布在细胞膜与细胞质。MEHP-AF能与ER结合呈现出黄色荧光,荧光密度随作用时间延长而更强。结论MEHP-AF作为一种新颖的荧光探针,它具有MEHP的脂溶性和5-AF的荧光特性。能在靶细胞原位、实时及可视化进行MEHP的亚细胞及分子水平的毒性机制研究。