论文部分内容阅读
神经迁移蛋白Slit2和其受体Robo1在免疫系统白细胞的运动过程中发挥重要作用。我们在外源OVA蛋白诱导的气道变应性炎症小鼠模型中初步证明，在哮喘病程中可检测到肺部Slit2表达的上调。外源Slit2蛋白的使用增强了炎症水平。Slit2在体内的过表达显著增强了以嗜酸性粒细胞为主要效应细胞的过敏性炎症水平，检测到呼吸道及肺组织中嗜酸性粒细胞浸润，体内IgE水平，呼吸道上皮分泌粘液质等均比对照有显著增加。在Slit2转基因小鼠中使用PI3K的抑制剂可以抑制由于Slit2的过表达而引起的炎症加剧。 应用Robo1的阻断性单抗则可下调哮喘的炎症水平。而与此对应的是，对于以中性粒细胞为主要效应细胞的急性肺炎模型，Slit2的过表达显著抑制了中性粒细胞向肺组织的浸润，应用Robo1的阻断性单抗则会一定程度上上调炎症水平。体外的细胞迁移实验也显示，Slit2对趋化因子引起的中性粒细胞和嗜酸性粒细胞的趋化运动的影响效应是截然不同的。Slit2蛋白本身对白细胞的迁移没有显著作用，却可在嗜酸性粒细胞中增强趋化因子Eotaxin引起的趋化运动，这一过程可被PI3K的抑制剂Wortmanin所抑制。而对SDF-1α引起的中性粒细胞的趋化运动却可观察到Slit2的抑制作用，这一过程看来与PI3K的活性变化无关。相应的分子机制研究我们发现，Slit2的刺激可促进嗜酸性粒细胞中受体Robo1与p85的结合，并看到Akt磷酸化水平的增加，提示PI3K活性的增加是Slit2在嗜酸性粒细胞中增强细胞趋化运动的原因之一。 我们发现Naf1α蛋白参与了这一过程并在Slit2刺激下与Robo1及p85形成复合物。Naf1α552位的酪氨酸可能对结合是关键的，这一位点的突变干扰了Robo1与p85的结合。并且Robo1与p85的结合可能也存在着Src激酶的调控机制，Src抑制剂PP2的处理也会干扰这一结合。在其它一些关于Slit2调控白细胞趋化运动的研究中，已知的主要分子机制是在Slit2的刺激下Robo1胞内CC3结构域通过结合srGAP1，可抑制Cdc42的活化从而抑制细胞的趋化运动。我们的研究结果显示:嗜酸性粒细胞的srGAP1的表达水平远低于中性粒细胞，Slit2蛋白可显著抑制中性粒细胞内Cdc42的活化，但对嗜酸性粒细胞则作用不明显。以上的实验结果支持我们提出如下假说解释:Slit2对白细胞的趋化运动可能有促进或抑制两方面的作用，依赖于Robo1下游Naf1α-PI3K和srGAP1-Cdc42 GTPase信号通路的平衡。本研究解决的主要问题集中在Slit2如何调节胞内PI3K的活性，Robo1通过何种分子与p85结合，Slit2的上调在哮喘的诊断与治疗中是否有一定的临床意义。该研究可以进一步完善对白细胞迁移和哮喘变应性炎症反应的认识。