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酯酶是一类能够催化水解、酯化、醇解、酯交换、转酯化等多种反应的生物催化剂,具有高底物专一性、区域选择性、对映选择性等优点,广泛应用于食品、医药、精细化工及环保等领域。本论文以实验室保藏的不解糖假苍白杆菌PSEUDOCHROBACTRUM ASACCHAROLYTICUM WZZ003为研究对象,分离纯化得到其能够立体选择性水解(R,S)-N-(2,6-二甲基苯基)氨基丙酸甲酯的胞内酯酶。克隆该酯酶编码基因,在大肠杆菌中实现高效表达,并对重组菌拆分(R,S)-N-(2,6-二甲基苯基)氨基丙酸甲酯进行了优化及其重复利用进行了研究。首先,不解糖假苍白杆菌PSEUDOCHROBACTRUM ASACCHAROLYTICUM WZZ003全细胞经过超声破碎,离心之后得到粗酶液,再经过DEAE阴离子交换层析、苯基疏水层析等方法分离得到一种酯酶,纯化倍数为96.7倍,收率为12.4%,酯酶的催化活力为1.2 U/mg。SDS-PAGE结果表明,该酶表观分子量为31 kDa。以PSEUDOCHROBACTRUM ASACCHAROLYTICUM WZZ003基因组DNA为模板,PCR扩增酯酶编码的基因片段,测序发现该基因片段全长813 bp,编码270个氨基酸。将该基因通过TA克隆连接至pEASY-blunt E1载体上并在E.coli BL21(DE3)中实现重组表达,诱导后菌体比活力可达123.3 U/g,相对野生菌的11.8 U/g提高了10倍。以重组酯酶工程菌为生物催化剂进行(R,S)-N-(2,6-二甲基苯基)氨基丙酸甲酯的拆分研究。在30℃,pH6.0,底物浓度350 mM的条件下,反应6 h,转化率大于49%,产物的e.e.值为98.0%。对重组酯酶工程菌重复利用批次进行研究发现,经过3个重复批次反应实验后重组大肠杆菌的酶活力为第1次酶活力的63%,第5次相对酶活力为32%。