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Nmi是干扰素诱导蛋白。研究表明在IFN-γ刺激下，Nmi能增加STAT1介导的转录，继而放大IFN-γ的生物学效应，提示Nmi在IFN-γ信号通路中发挥了重要的作用。基于此，本课题通过酵母双杂交系统筛选与Nmi相互作用的蛋白，为揭示Nmi蛋白调控IFN-γ信号通路的分子机理提供有用的线索。本课题以Nmi为诱饵蛋白，构建诱饵质粒pGBKT7-Nmi，经自激活检测证实Nmi蛋白没有自激活活性。将诱饵质粒pGBKT7-Nmi与人胚肾cDNA文库质粒共转化入酵母细胞AH109进行酵母双杂交实验。经SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp平板筛选及β-半乳糖苷酶活性检测鉴定，确定其为阳性克隆，抽提阳性克隆中的文库质粒，电转化至大肠杆菌DH5α中，PCR扩增文库插入片断后进行Hae Ⅲ酶切去重复，然后将非重复的阳性克隆进行测序，测序结果在GenBank上进行同源性搜索和序列比对分析，最后得到潜在的与Nmi相互作用的蛋白31个。小泛素样修饰蛋白(SUMO)连接酶UBE2I是其中一个蛋白。UBE2I为泛素连接酶2I，能转移泛素样蛋白SUMO到目标蛋白上，使目标蛋白发生SUMO化修饰。STAT1能发生SUMO化修饰，且SUMO化修饰会抑制STAT1的转录活性。为进一步研究Nmi对STAT1SUMO化修饰的影响，通过PCR获得UBE2I全长ORF后，构建pGADT7-UBE2I质粒，利用酵母双杂交实验证实在酵母细胞中Nmi能够与UBE2I发生相互作用。随后，构建pGEX4T1-Nmi、pCDNA3.1(+)-UBE2I-3×Flag和pCDNA3.1(+)-Myc-Nmi质粒，通过GST pull-down、免疫共沉淀和免疫荧光实验确认了Nmi和UBE2I间的相互作用。并确定了Nmi与UBE2I发生相互作用的结构域为Nmi的1-199个氨基酸区域。哺乳动物细胞免疫荧光实验结果表明Nmi改变了UBE2I的核定位。蛋白质SUMO化修饰通常发生在细胞核中，UBE2I的核定位的改变可能会影响核内蛋白SUMO化水平。因此，上述结果提示Nmi可能通过与UBE2I的相互作用，下调STAT1的SUMO化修饰水平，继而达到增强STAT1介导的IFN-γ信号通路活性的目的。