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目的:观察梯度浓度胸腺素β4(Thymosin-β4)对大鼠骨髓源性内皮祖细胞(EPCs)生物学行为的影响,为改善EPCs移植治疗中枢神经系统损伤这一策略的有效性,推动EPCs移植为主体的治疗手段在临床中的应用提供更为广泛的思路。方法:SPF级SD大鼠90~100 g,雌雄不拘,采用密度梯度离心法分离大鼠骨髓源性单个核细胞,接种于鼠纤维连接蛋白(FN)预先包被过夜的24孔培养板中,以含有10%胎牛血清(FBS)的EGM-2完全培养基培养,隔日换液,7d后行细胞形态学及免疫细胞化学双抗体荧光检测(CD133及VEGFR-2),激光共聚焦显微镜观察并记录拍照,同时行Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白及异硫氰酸荧光素荆豆凝集素-1(Dil-ac-LDL及FITC-UEA-1)荧光检测吞噬实验,激光共聚焦显微镜观察并记录拍照,进一步鉴定目的细胞为内皮祖细胞。设置梯度浓度的Tβ4(1 000ng/ml、100 ng/ml、10 ng/ml、1 ng/ml)条件培养基分别处理EPCs,分别采用CCK-8细胞增殖实验、粘附能力实验以及Transwell细胞迁移能力实验以观察EPCs的增殖能力、粘附能力及迁移能力的变化。同时在统一浓度(1 000 ng/ml)下干预不同时间(24 h、48 h、72 h)后以上述同样的方法分别进行细胞功能学实验以观察EPCs的增殖能力及迁移能力的变化。结果:Tβ4能够显著增强体外培养EPCs的增殖、迁移和黏附能力,并且呈现一定的剂量效应关系,在1 000 ng/ml条件培养基培养时其增殖、迁移及黏附能力均得到显著增强(与对照组相比,P<0.05)。在1 000 ng/ml条件培养基培养时随着干预时间的逐渐推移,各时间点的EPCs增殖能力均显著增强且优于空白对照组(P<0.05);黏附能力在48 h达到最大效应(与对照组相比,P<0.05)。结论:Tβ4可显著增强体外培养的大鼠骨髓源性EPCs的生物学活性,并且呈现一定的剂量效应关系,1 000 ng/ml Tβ4条件培养基下预处理48 h可获得最优生物学效应。