环境水样中微囊藻毒素-LR的快速检测方法研究

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微囊藻毒素(Microcystins,MCs)是一类具有肝毒性的环状七肽类化合物。其中,微囊藻毒素-LR(Microcystin-LR,MC-LR)因其污染范围广、毒性强,对人民的健康构成严重危害而备受关注。因此,建立快速、可靠的分析方法对环境水样中的MC-LR进行监测是保障人民健康的重要技术手段。本文旨在制备MC-LR多克隆抗体和金纳米材料,并以此作为核心检测试剂,建立表面增强拉曼光谱(Surface-enhanced Raman spectroscopy,SERS)分析方法,为环境水样中MC-LR的监控提供快速准确的技术手段。制备了MC-LR免疫原(MC-LR-BSA)和包被原(MC-LR-KLH)。使用MC-LR-BSA免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体(polyclonal antibodies,PcAb),通过间接竞争ELISA方法对抗体性质进行鉴定。多克隆抗体对MC-LR的IC50值是0.53 ng/mL,与节球藻毒素(Nodularin,NOD)、微囊藻毒素-YR(Microcystin-YR,MC-YR)、微囊藻毒素-RR(Microcystin-RR,MC-RR)的交叉反应率(Cross-reactivity,CR)分别为113.05%、108.33%和106.12%,与微囊藻毒素-WR(Microcystin-WR,MC-WR)、微囊藻毒素-LF(Microcystin-LF,MC-LF)、微囊藻毒素-LY(Microcystin-LY,MC-LY)、微囊藻毒素-LW(Microcystin-LW,MC-LW)和微囊藻毒素-LA(Microcystin-LA,MC-LA)的CR分别为2.44%、1.19%、1.20%、3.85%和25.02%。使用多克隆抗体建立了水样中MC-LR的ELISA检测方法,方法灵敏度0.53 ng/mL,检测限0.09 ng/mL,回收率70%83%。利用柠檬酸还原法制备了球形的金纳米颗粒(GNPs),并以此为基础分别使用St?ber沉积法和生长法制备了核壳结构的Au@SiO2和刺状金纳米颗粒(spiny gold nanoparticles,SGNPs),利用紫外-可见吸收光谱(Ultraviolet visible,UV-vis)和透射电镜(transmission electron microscopy,TEM)分别对其进行表征;以对巯基苯甲酸(4-mercaptobenzoic acid,4-MBA)为SERS探针分子,分别研究其SERS活性。结果显示,与其他形貌的金纳米颗粒相比,刺状金纳米颗粒显示出了更佳的SERS增强效果,尤其是其中三角状金纳米颗粒。以MC-LR多克隆抗体和三角状金纳米颗粒作为核心检测试剂,以硝酸纤维素膜为纸基载体,建立了检测环境水样中MC-LR的SERS检测法,方法IC50值为0.3ng/mL,线性范围为0.0910ng/mL,检测限为0.04ng/mL。对环境水样进行添加回收实验,MC-LR的回收率为94%118%,变异系数≤5.6%。建立了环境水样中MC-LR的无标记SERS检测方法,方法的检测限为1.0μg/L,在1.0100μg/L范围内呈现良好的线性关系。本研究建立的方法在0.140μg/mL的添加水平,回收率为80%102%,并且在发生MC-LR污染的河水样本中,其检测结果与LC-MS/MS的检测结果相关性良好,相关系数为0.84。
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