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目的：研究同种异基因小鼠角膜移植后植片的生存时间及J2的抗角膜排斥反应的作用；研究J2对正常小鼠及同种异基因角膜移植小鼠的免疫系统的影响，从而探讨新型药物J2对于角膜移植排斥反应的作用机制。方法：1．建立以C57BL／6小鼠为供体，BALB／c小鼠为受体的角膜移植实验模型，随机分为A、B、C、D四组，每组16只。A组为BALB／c小鼠自体原位角膜移植，B、C、D组均采用C57BL／6-BALB／c同种异体角膜移植，术后采用腹腔注射给药，自手术当日开始，A组、B组给予安慰剂，C组给予CsA10mg／kg，D组给予J215mg／kg，每天1次，连续给药12d。观察各组植片生存指数变化，腿染色及冰冻切片免疫组化观察角膜植片病理改变。2．BALB／c小鼠随机分为3组，并分别以安慰剂、CsA、J2连续腹腔注射12d。取脾细胞分别给予ConA和抗CD3mAb刺激细胞增殖，采用ELISA法测定细胞上清中IL-2、IFN-γ、IL-4及IL-10等细胞因子的含量。比较各组细胞增殖指数及细胞因子含量。3．建立小鼠角膜移植模型，随机分为A、B、C、D、E五组。A组为空白对照组，B组为自体原位移植组，C、D、E组均采用C57BL／6-BALB／c同种异体角膜移植模型，术后采用腹腔注射给药，自手术当日开始，B组、C组给予不含药物的安慰剂，D组给予CsA10mg／kg，E组给予J2 15mg／kg，每天1次，连续给药12d。流式细胞仪连续观察各组小鼠外周血总CD3~+T淋巴细胞、CD3~+CD4~+T淋巴细胞、CD3~+CD8~+T淋巴细胞的动态变化趋势；停药后7天，取脾细胞分别给予ConA、抗CD3mAb及异基因角膜蛋白刺激细胞增殖，采用ELISA法测定细胞上清中IL-2、IFN-γ、IL-4及IL-10等细胞因子的含量，比较各组细胞增殖指数及细胞因子含量。4．建立小鼠角膜移植模型，随机分为A、B、C、D、E五组。A组为空白对照组，B组为自体原位移植组，C、D、E组均采用C57BL／6-BALB／c同种异体角膜移植模型，术后采用腹腔注射给药，自手术当日开始，B组、C组给予不含药物的安慰剂，D组给予CsA10mg／kg，E组给予J2 15mg／kg，每天1次，连续给药12d。分别在术后1w、2w、3w、4w行RT-PCR检测角膜植片中细胞因子的表达。结果：同种异体移植安慰剂组角膜植片平均存活时间为18.87±4.19d，J2组发生排斥时间明显延迟为33.12±6.80d，两组比较具有统计学差异(P=0.000)，但J2组与CsA组比较无统计学差异。组织学检查证实，术后21天见大量细胞浸润，而J2组和CsA组植片未见明显的细胞浸润。免疫组化显示手术后21天安慰剂组角膜植片大量CD4~+和CD8~+T淋巴细胞浸润，J2组和CsA组植片仅有少量的CD4~+和CD8~+T淋巴细胞浸润。ConA刺激正常小鼠脾细胞后J2组细胞增殖指数较对照组降低，分别为空白组9.61±2.20，J2组6.53±3.21；J2组IL-2和IFN-γ的含量较对照组低，两组差异均有统计学意义。CsA组与J2组比较差异均无统计学意义。抗CD3mAb刺激后J2组细胞增殖指数较对照组降低，分别为空白组9.52±2.44，J2组3.27±1.33；J2组IL-2和IFN-γ的含量较对照组低，两组差异均有统计学意义。CsA组与J2组比较差异均无统计学意义。各组IL-4及IL-10的含量差异无统计学意义。流式细胞仪结果显示：①移植1周后，自体原位移植小鼠外周血淋巴细胞中，总CD3~+T淋巴细胞、CD4~+T淋巴细胞、较正常小鼠升高，在移植3周以后呈下降趋势，而CD8~+T淋巴细胞变化不明显；②同种异基因角膜移植安慰剂组小鼠在角膜移植后1至2周，总CD3~+T淋巴细胞、CD4~+T淋巴细胞、CD8~+T淋巴细胞与自体原位角膜移植组相似，均呈升高趋势。在角膜移植后第3周总CD3~+T淋巴细胞、CD4~+T淋巴细胞、CD8~+T淋巴细胞较空白对照组和原位角膜移植组明显升高。在移植后第4周，总CD3~+T淋巴细胞、CD4~+T淋巴细胞及CD8~+T淋巴细胞均呈下降趋势。③在同种异基因角膜移植J2给药组，总CD3~+T淋巴细胞、CD4~+T淋巴细胞、CD8~+T淋巴细胞的动态变化趋势与自体原位移植组及CsA给药组基本相同。角膜移植后应用ConA、抗CD3mAb和异基因角膜蛋白刺激后小鼠脾细胞明显增殖，J2能够明显抑制ConA、抗CD3mAb及异基因角膜蛋白刺激角膜移植后小鼠脾细胞的增殖。异基因小鼠角膜移植后3周左右小鼠脾细胞中IL-2及IFN-γ的含量明显增加，以IFN-γ更为显著，而IL-4及IL-10的含量没有明显变化，腹腔注射J2后，IFN-γ的含量明显降低。应用非特异性和特异性抗原刺激后ELISA法检测结果表明角膜移植小鼠脾细胞分泌IFN-γ显著增多，J2可抑制各种抗原诱导的IFN-γ产生。RT-PCR结果显示：在正常小鼠角膜未见RANTES、IFN-γ、IL-2、IL-10及IL-4基因表达。自体移植组RANTES、IL-2、IL-10和IFN-γ基因在第1周均有少量表达，而其它3周没有显著表达；异基因移植组从第1周开始表达各种基因，第3周表达明显增强；而CsA组和J2组从第1周开始表达，第2、3周表达减弱，第4周表达强于前3周。结论：①J2在小鼠角膜移植模型具有抗角膜移植排斥作用，其抗排斥作用与CsA相近；②小鼠角膜移植排斥反应发生时，外周血中CD4~+T淋巴细胞明显增多，J2可能通过抑制CD4~+T淋巴细胞而抑制角膜排斥反应的发生；③J2能够明显抑制ConA和抗CD3mAb刺激角膜移植后小鼠脾细胞的增殖；④Th1细胞在异基因小鼠角膜移植中起主要作用，而Th2细胞起次要作用。J2能够抑制T细胞活化，减少Th1细胞因子分泌的作用，但并没有诱导出免疫耐受；⑤RANTES基因参与了异基因小鼠角膜移植排斥反应，J2可以抑制其表达。