[目的]Notch3是调控细胞发育和分化Notch家族重要成员之一。既往研究表明,Notch3与多种肿瘤的发生、发展密切相关,然而其在肺癌中作用机制仍未明确。新近的研究表明,在卵巢癌中,Pbx1为Notch3的下游基因,两者存在物理性的结合,Notch3活化后形成NICD3/CSL复合体能够直接引发Pbx1的转录调控,促进肿瘤细胞增殖。同时,本实验室前期结果结果显示,Pbx1可促进非小细胞肺癌细胞增殖。由此,我们推测非小细胞肺癌细胞增殖可能机制：Notch3调控Pbx1,导致非小细胞肺癌恶性增殖。本研究拟通过细胞功能实验结合人体组织标本检测,获得Notch3可能调控Pbx1对非小细胞肺癌细胞增殖影响的可靠证据,同时通过相关机制研究,探讨Notch3调控Pbx1促进非小细胞肺癌增殖的的机制,为进一步研究非小细胞肺癌发病分子机理提供实验依据。[方法]采用免疫组织化学法检测Notch3在非小细胞肺癌临床组织标本及肺良性病变组织中的表达情况；统计分析Notch3与Pbx1两者在相同非小细胞肺癌临床标本中表达相关性；以非小细胞肺癌株A549细胞为模型,构建慢病毒载体系统敲减Notch3,通过细胞增殖实验、流式细胞周期检测、western blot等主要技术,探讨Notch3对非小细胞肺癌细胞增殖、细胞周期以及细胞周期相关蛋白以及下游Pbx1蛋白表达的影响。[结果]1、 Notch3在非小细胞肺癌组织中表达显著高于肺良性病变组织,且表达与Pbxl蛋白呈正相关：·人体非小细胞肺癌组织及肺良性病变组织中检测Notch3蛋白表达情况,结果提示,Notch3在人体非小细胞肺癌组织中的阳性表达率明显高于肺良性病变组织的阳性表达率(p<0.05)；Notch3的阳性表达与非小细胞肺癌T分期有统计学意义(p<0.05)。·相关性分析,结果提示,体非小细胞肺癌组织中Notch3与Pbxl蛋白表达呈正相关性(相关系数r=0.449,p<0.05)。2、在非小细胞肺癌株A549细胞中,敲减Notch3抑制细胞增殖：·MTS实验结果显示,Notch3-shRNA组较Blank组和scramble组细胞增殖能力减弱(p<0.05)；平板集落形成实验结果显示,Notch3-shRNA组较空白对照Blank组和阴性对照scramble组细胞克隆能力减弱(p<0.05)。·敲减Notch3使细胞周期阻滞G0/G1期：流式细胞周期检测结果显示,敲除Notch3的表达后,Notch3-shRNA组较空白对照Blank组和阴性对照scramble组,G0/G1期细胞明显增加,S期细胞减少(p<0.05)。·进一步检测细胞周期相关蛋白表达结果显示,细胞周期蛋白CyclinE1、 CyclinE2、 CyclinD3、细胞周期蛋白依赖性激酶CDK1、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子P21表达降低,细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4表达升高；细胞周期蛋白CyclinA2、 CyclinB1、 CyclinD2、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子P27表达无明显变化。3、Notch3可能通过调控Pbxl促进肺癌细胞增殖：·敲减Notch3后,Pbxl的表达降低；结合人体组织水平中Notch3与Pbxl在NSCLC临床标本相关性分析提示,Notch3与Pbxl蛋白表达呈正相关性；新近文献报道,Notch3与Pbxl两者存在物理形结合位点,以及我们实验室前期实验结果,Pbxl可促进非小细胞肺癌增殖。[结论]Notch3可能通过调控Pbxl进而促进非小细胞肺癌异常增殖。