目的 设计并建立通用引物聚合酶链反应(UP-PCR)结合限制性酶切片段长度多态性(restriction fragment length polymorphisms,RFLP)酶切图谱分析快速检测无菌体液标本中常见病原菌的方法。 方法 通过对体液标本种常见病原菌16S rRNA基因保守区的序列分析，设计通用引物，对不同细菌的DNA进行UP-PCP扩增，确定标本是否有细菌感染，然后对阳性标本的扩增产物分别用不同的限制性内切酶酶切，进行RFLP分析，进一步鉴定细菌。 结果 所有对照菌株经扩增后均有1032bp长度的DNA片段产生，但经HaeⅢ 消化后的酶切图谱各异。金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌的PCR产物不能被HaeⅢ消化，但用MnⅡ消化则有不同的酶切图谱。肺炎链球菌、粪肠球菌、屎肠球菌HaeⅢ酶切图谱相同，但用AluⅠ酶切则不同。大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、粘质沙雷菌也能产生相同的酶切图谱，但DdeⅠ的酶切图谱各异。该通用引物最低可检测8CFU／ml大肠埃希菌，250CFU／ml金黄色葡萄球菌。检测了102例脑脊液标本，与培养法相比，通用引物PCR的敏感性为92.3％。结果显示，通用引物PCR结合限制性酶切分析可用于检测何鉴定临床标本种的病原菌。 结论该方法可以准确、快速地检测出体液标本中感染的病原菌。