【摘 要】
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目的:探索大鼠蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage,SAH）早期脑损伤（early brain injury,EBI）脑组织中肝配蛋白B3（Eph receptor interactiong protein,Ephrin B3）、MMP9、occludin的表达变化;以及探索Ephrin B3是否通过保护血脑屏障的完整性参与蛛网膜下腔出血早期脑损伤。方法:采用血管内穿刺法
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目的:探索大鼠蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage,SAH）早期脑损伤（early brain injury,EBI）脑组织中肝配蛋白B3（Eph receptor interactiong protein,Ephrin B3）、MMP9、occludin的表达变化;以及探索Ephrin B3是否通过保护血脑屏障的完整性参与蛛网膜下腔出血早期脑损伤。方法:采用血管内穿刺法建立大鼠SAH模型,选取SAH评分≥9分的大鼠进行实验。采用免疫印迹（western blot,WB）法检测大鼠SAH后早期穿刺侧脑组织中Ephrin B3、occludin、MMP9的表达;于上述蛋白表达最明显的时间点取材,应用免疫荧光（immunofluorescence,IF）双标法检测大鼠SAH后Ephrin B3蛋白在星形胶质细胞、脑微血管内皮细胞（brain microvascular endothelial cells,BMEC）上的表达;运用干湿重法测量大鼠SAH后脑组织含水量（brain water content,BWC）观察脑水肿的严重程度;采用改良Garcia、平衡木试验对早期SAH大鼠进行神经功能评估,同时对SAH组大鼠的死亡率进行统计计算。给予Ephrin B3 si RNA后,对各组大鼠的神经功能、各部分脑组织含水量以及Ephrin B3、occludin、MMP9表达的变化情况进行评估。结果:在大鼠蛛网膜下腔出血后,神经行为学中观察到,在平衡木和Modified Garcia试验中,SAH后6h、12h、24h、72h的神经功能均受到损伤,与假手术组（sham）比较,有明显统计学差异（p＜0.05）;在脑含水量的测定中,发现SAH后6h、12h、24h、72h的大鼠左、右大脑半球及小脑的BWC明显高于sham组,有统计学差异（p＜0.05）,而脑干的BWC与sham组相比较则无统计学差异（p＞0.05）。Western blot法检测Ephrin B3,occludin,MMP9在SAH后不同时间点的表达水平,发现SAH后6h、12h、24h、72h大鼠脑组织Ephrin B3蛋白表达呈逐渐升高趋势;MMP9蛋白表达于SAH后24h达到高峰后直至72h才有所下降;occludin蛋白在SAH 3h后呈明显的下降趋势。Ephrin B3、MMP9蛋白在SAH后12h、24h、72h的表达均显著高于sham组（p＜0.05）;而occludin蛋白在SAH后6h、12h、24h、72h的表达水平则显著低于sham组（p＜0.05）。于SAH后24h应用免疫荧光双标法观察到Ephrin B3蛋白在星形胶质细胞、脑微血管内皮细胞（BMEC）上均有表达。在转染si RNA,使Ephrin B3基因沉默后,于SAH24h后观察到大鼠神经功能受损更加严重、脑含水量升高,脑组织Ephrin B3、occludin蛋白表达减少,MMP9蛋白表达增高。结论:1.Ephrin B3、MMP9、occludin在蛛网膜下腔出血早期呈动态表达。2.Ephrin B3可能通过调控MMP9、occludin的表达从而减轻血脑屏障的破坏参与蛛网膜下腔出血早期脑损伤。
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