丹参组织培养及原生质体分离的研究

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丹参又为血参、紫丹参,是我国重要的传统中药材。本文选用丹参茎节段为外植体建立丹参的无菌体系,以丹参无菌苗的幼嫩叶片为外植体,通过研究植物生长调节剂的种类及浓度对丹参愈伤组织诱导、愈伤组织分化为芽及无菌苗生根的影响,建立丹参的离体再生体系。同时,以丹参幼嫩叶片和愈伤组织为外植体,研究了原生质体分离的材料、不同酶液浓度、酶解时间、渗透压浓度、预处理方法对丹参原生质体游离的产量及活力的影响,及原生质体的培养条件,从而初步建立丹参原生质体的培养体系。为解决丹参供求矛盾、实现大规模生产、培养高产高效丹参植株提供借鉴,研究结果如下:1.丹参无菌体系的建立:丹参茎段的最佳灭菌方法是75%乙醇溶液表面消毒1min,无菌水冲洗5次,0.1%的升汞溶液处理10min,无菌水冲洗5次;2.丹参无菌苗叶片的愈伤组织最佳诱导培养基是:MS+2,4-D0.5mg/L+6-BA1.0mg/L;3.丹参愈伤组织分化为芽的最佳培养基是:MS+0.5mg/L6-BA+0.1mg/LNAA;4.根的诱导:(1)丹参试管苗生根的最佳基本培养基是1/2MS,每株试管苗平均生根率为57.41%,平均根数为2.07条;(2)IBA的生根率及根的长势整体比NAA效果好,IBA浓度为0.2mg/L~0.6mg/L时丹参试管苗的生根率差异不显著,IBA浓度较高时根部愈伤化严重,最佳生根培养基是:1/2MS+0.2mg/L IBA;5.丹参无菌苗叶片利于原生质体的分离,原生质体产量为4.57×105个/g,原生质体活力为63.63%;6.丹参叶片原生质体分离的最佳酶液组合是:2.0%纤维素酶+0.5%果胶酶+0.5%半纤维素酶;7.黑暗振荡酶解12h是丹参叶片原生质体分离的最佳酶解时间;8.甘露醇浓度为0.6mol/L时,原生质体内外压力较为平衡,是丹参叶片释放原生质体适宜的渗透压浓度;9.质壁分离1h比对照组原生质体产量提高了37.49%;10.丹参原生质体的培养: DPD培养液原生质体的分裂频率比MS高4.53%,但植板率为0.83%。
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