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肝衰竭、肝硬化和原发性肝癌等终末期肝病严重威胁人类的健康。我国每年因原发性肝癌死亡人数达20万；1990年美国因肝衰竭死亡达27，000人；据55个国家向WHO提供的数字，每年全世界死于肝硬化的人数超出31万，近几年来已增加到50万。目前已有的治疗手段当中，只有肝脏移植能彻底治疗终末期肝病。但是肝脏移植后供体肝的再生能力低下严重限制了肝脏移植的治疗效果和大规模临床应用。其主要原因在于对肝脏再生的机制的研究仍然处于初级阶段，对肝脏再生的机制了解不够详细。目前的研究认为肝脏再生受到多种基因和信号通路的调控。对肝脏再生的机制研究其目的是能够找到促进肝脏再生的药物，以提高肝脏移植后病人的存活率。
肝脏内有大量自主神经分布，近来自主神经在肝脏再生过程中作用日益引起人们的关注。研究资料显示交感神经和迷走神经都参与肝脏部分切除后的再生过程。最新的研究还发现神经递质5-羟色胺在肝脏再生过程中起着重要作用。文献显示在豚鼠、狗、猪、猴及人的肝实质中也有NPY阳性自主神经，且在肝细胞周围交织成网状。应用全基因组表达芯片，我们对小鼠肝脏四氯化碳损伤后再生过程中全基因组表达作了系统研究，发现神经肽酪氨酸(NPY)的基因表达与肝脏损伤后再生相关。目前还未见NPY调节肝脏再生过程的研究报道。本课题拟制备小鼠NPY(mNPY)的真核表达质粒通过电转染小鼠大腿肌肉的方式来初步检测NPY对肝脏功能和肝细胞增殖的影响；然后再通过给小鼠注射蛋白的方式进一步确认初步的实验结果；最后再利用NPY多克隆抗体阻断四氯化碳损伤后的小鼠肝脏再生过程最终确定NPY的作用。本课题的研究结果有望为找到促进肝脏移植后供体肝的再生药物的研究提供新的线索。
本课题从基因克隆开始，构建了mNPY的真核表达质粒。再将构建好的mNPY真核表达质粒电转染到小鼠大腿肌肉细胞内提高小鼠血浆内的NPY浓度，再检测肝脏功能和增殖的相关指标。然后，人工合成NPY多肽并注射小鼠进一步重复mNPY真核质粒电转染实验结果。最后构建mNPY原核表达载体，在大肠杆菌中表达mNPY融合蛋白，经过纯化后免疫大白兔获得mNPY兔多克隆抗体，再利用获得的多克隆抗体阻断小鼠四氯化碳后肝脏损伤再生过程。
本研究的主要结果和结论如下：利用PCR方法成功从小鼠肝脏cDNA文库中克隆得到mNPY成熟肽的基因片断，琼脂糖凝胶电泳验证约300bp大小；成功将mNPY成熟肽克隆到pcDNA、PET-28和PET-30载体上，并且测序结果正确；成功表达mNPY融合蛋白并制备了mNPY融合蛋白兔多克隆抗体，且Westernblot检测抗体效价较高;mNPY真核表达载体电转染实验和NPY多肽小鼠注射实验发现NPY可能促进肝细胞的增殖；mNPY融合蛋白兔多克隆抗体阻断小鼠肝脏四氯化碳损伤实验发现肝脏损伤后再生过程受到延迟。以上实验结果初步说明NPY可能在小鼠肝脏损伤再生过程中起着重要作用。本课题为进一步研究NPY调节肝脏再生作用和作用机理奠定了实验基础。