在脑肿瘤及非小细胞肺癌等多种人类肿瘤类型中常见受体型酪氨酸激酶EGFR的突变形式,其中激酶区域的热点突变使其TKIs治疗产生获得性耐药,尤其确定了次级突变T790M是原因之一。EGFR下游各信号通路中PI3Ks类型Ⅰ四个亚型激酶的研究及小分子抑制剂的发现均对频繁出现的获得性耐药机制的缓解有益。本文研究采用EZ Reader系列药物筛选平台的微流体芯片迁移率检测技术,尝试对野生型EGFR和双突变型EGFR (T790M/L858R)两种酶的高通量筛选模型的建立。该方法可直接检测出底物和磷酸化产物的出峰并定量二者的转化率,避免假阳性的发生,直接有效。由于T790M突变使得EGFR双突变型激酶增强了对ATP的亲和力,表现出更好的活性并对抑制剂的抑制效果更为明显。本文研究较针对性地选用ADP-Glo Lipid Kinase试剂来进行作用底物为脂类的PI3Ks类型Ⅰ四个亚型激酶的高通量筛选任务。模拟实验设计时四种亚型激酶的反应缓冲液及底物浓度甚至来源不尽相同,验证筛选模型有效性的抑制剂有针对性选用PI-103,结果显示PI3Ks类型Ⅰ的四个亚型激酶活性较同一。